Использование методов in vitro в селекции растений. Современные проблемы науки и образования В условиях in vitro

В. В. Роговая, М. А. Гвоздев

ОСОБЕННОСТИ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ КОСТОЧКОВЫХ КУЛЬТУР В УСЛОВИЯХ IN VITRO

В работе представлен обзор, в котором рассматриваются особенности методов микроклонального размножения косточковых плодовых культур в системе in vitro. Особое внимание уделено методу размножения пазушными почками и методу регенерации адвентивных побегов из листовых эксплантов вишни, черешни, персика и абрикоса. Рассмотрены вопросы оздоровления растений от различных патогенов и тестирования растительного материала косточковых культур на наличие вирусных инфекций.

Впервые микроклональное размножение провел французский ученый Жорж Морель на орхидеях в 50-х годах ХХ века. В своих работах он использовал технику культивирования апикальной меристемы растений. Растения, полученные таким образом, были свободны от вирусной инфекции.

В нашей стране исследования по оздоровлению растений методом меристем и по клональному микроразмножению начались в 60-х годах в Институте физиологии растений им. К. А. Тимирязева АН СССР .

Микроклональное размножение - получение in vitro растений, генетически идентичных исходному экспланту (метод вегетативного размножения растений в культуре in vitro). В основе микроразмножения лежит уникальное свойство соматической растительной клетки - тотипотентность - способность клеток полностью реализовать генетический потенциал целого организма .

В настоящее время все большую актуальность приобретают различные методы микроклонального размножения сельскохозяйственных культур (прежде всего вегетативно размножаемых) в системе in vitro: размножение пазушными и адвентивными почками, непрямой морфогенез, соматический эмбриогенез.

Использование этих методов дает возможность:

Ускорять селекционный процесс, в результате этого сроки получения товарной продукции сокращаются до 2-3 лет вместо 10-12;

Получать за короткий срок большое количество оздоровленного, безвирусного материала, генетически идентичного материнскому растению;

Работать в лабораторных условиях и поддерживать активно растущие растения круглый год;

Размножать растения практически без контакта с внешней средой, что исключает воздействие неблагоприятных абиотических и биотических факторов;

Получать максимальное число растений с единицы площади;

В короткий срок получать большое число растений трудноразмножае-мых или вегетативно неразмножаемых;

При выращивании растений с длительной ювенильной фазой можно ускорять переход от ювенильной к репродуктивной фазе развития;

Длительно (в течение 1-3 лет) сохранять растительный материал в условиях in vitro (без пассирования на свежую среду) ,

Создавать банки длительного хранения ценных форм растений и отдельных их органов;

Разрабатывать методы криосохранения оздоровленного in vitro материала .

Этапы микроклональногоразмножения косточковых плодовых культур и тестирование на наличие вирусных инфекций

Процесс микроклонального размножения включает несколько этапов. Основными из них являются :

1-й этап - введение экспланта в культуру in vitro;

2-й этап - микроразмножение;

3-й этап - процесс укоренения микропобегов;

4-й этап - осуществление выхода укорененных растений из стерильных условий в нестерильные.

Важным этапом в методике микроразмножения растений in vitro является выращивание безвирусных маточных форм растений в вегетационных домиках или изолированных боксах в зимних теплицах, в условиях, недоступных для переносчиков вирусов. Растения-доноры эксплантов для последующего введения в культуру in vitro должны быть протестированы на наличие вирусных, ми-коплазменных и бактериальных инфекций с помощью методов ПЦР-диагностики либо молекулярной гибридизации, либо иммуноферментного анализа (ИФА) .

Метод ИФА позволяет в сжатые сроки выявлять подавляющее большинство вирусов, заражающих косточковые культуры: вирусы карликовости сливы, некротической кольцевой пятнистости косточковых, потивирус шарки слив, не-повирусы скручивания листьев черешни. Клоны, оказавшиеся свободными от контактных вирусов по результатам проверки методом ИФА, подвергают затем основному тестированию, включающему серологические тесты в сочетании с тестом на растениях-индикаторах. Растениям, оказавшимся по результатам тестирования свободными от вирусов и других регламентируемых патогенов, присваивается категория «безвирусных» базисных клонов. В случае выявления инфекции исходные растения могут подвергнуть оздоровлению. Для оздоровления растений косточковых культур от вирусов наиболее целесообразно сочетать методы суховоздушной термотерапии и культуры in vitro. Если с помощью культуры изолированных апикальных меристем не удается освободиться от тестируемых вирусов, используют методы хемотерапии, основанные на введении в питательные среды химических веществ, ингибирующих развитие вирусной инфекции в растениях in vitro .

Иногда для активного выявления бактериальной микрофлоры среды обогащают различными органическими добавками, например гидролизатом казеина, который провоцирует развитие сапрофитных микроорганизмов . Оценку зараженности проводят визуально через 7-10 дней. «Чистые» экспланты помещают на питательные среды для дальнейшего культивирования. Практикуют на этой ступени и применение сред, лишенных ростовых веществ .

Введение в культуру in vitro и микроразмножение плодовых косточковых культур

При клональном микроразмножении плодовых косточковых культур в качестве источника эксплантов обычно используют верхушечные и боковые почки, а также меристематические верхушки. Вычленение верхушечной меристемы проводят по общепринятым методикам после ступенчатой стерилизации растительного материала .

Для микроклонального размножения косточковых культур используют различные среды: для микроразмножения вишни - среды Пиерика, Готре, Уайта, Хеллера , для вишни и сливы - среду Розенберга, модифицированную для плодовых культур и для сливы - среду Лепуавра и В5 . Но наиболее подходящей для микроклонального размножения вишни, черешни и сливы является питательная среда Мурасиге-Скуга (МС) .

В зависимости от этапа микроклонального размножения плодовых косточковых культур к питательным средам добавляют 6-бензиламинопурин (6-БАП) в концентрациях 0,2-2 мг/л . На этапе введения в культуру in vitro используют более низкую концентрацию цитокинина - 0,2 мг/л БАП . Для индукции пролиферации пазушных почек с целью получения максимального числа побегов микрорастения вишни культивируют с добавлением БАП, в концентрациях 0,5-2 мг/л , микрорастения сливы 0,5 - 1 мг/л БАП .

Процесс укоренения микропобегов

Особого внимания требует этап укоренения. Процесс укоренения in vitro побегов плодовых косточковых культур зависит от сортовых особенностей , от числа проведенных пассажей, от концентрации и типа ауксина, от способа его применения . Для получения полностью сформированных микрорастений плодовых косточковых культур из среды исключается 6-БАП, препятствующий процессам ризогенеза, и в среды вводятся ауксины, в основном - в-индолил-3-масляная кислота (ИМК) . Установлено, что оптимум концентраций ИМК в составе питательной среды находится в пределах 0,5-1 мг/л . Присутствие в среде ИМК в концентрации 2 мг/л вызывает образование гипертрофированных корней .

Совместное введение в среду для укоренения препарата рибав (1 мл/л) и традиционных фитогормонов ауксинов [ИМК и в-индолилуксусной кислоты (ИУК) по 0,5 мг/л каждого] повышает процент укоренения побегов ряда сортов косточковых культур .

При сравнительном изучении индукторов корнеобразования: ИМК, ИУК и а-нафтилуксусной кислоты (НУК), была выявлена высокая эффективность ИУК в концентрации 6,0 мг/л . Наибольшее число укоренившихся микрочеренков вишни было получено на среде, содержащей НУК . Однако при этом на базальном участке побегов происходило интенсивное разрастание каллуса, что затрудняло перенос пробирочных растений с корнями в нестерильные условия.

Для эффективного укоренения пробирочных растений косточковых культур большое значение имеет не только тип стимулятора, но и способ его аппликации. Помимо введения ауксинов в питательную среду, для индукции ризоге-неза используют предварительное замачивание побегов в стерильном водном растворе ИМК (25-30) мг/л при экспозиции 12-24 часа . Проведенные эксперименты показали, что обработка микрочеренков водным раствором ИМК более эффективна, чем введение этого регулятора в культураль-ную среду. Массовое появление первых придаточных корней при применении предварительной обработки индуктором ризогенеза отмечалось на 20-25 день . Еще одним способом индукции ризогенеза является обработка побегов плодовых косточковых культур тальковой ауксинсодержащей пудрой ИМК с концентрацией 0,125%, 0,25% и ИУК с концентрацией 0,25%, 0,5% . При использовании гормональной пудры отмечалась высокая эффективность и технологичность применения индукторов ризогенеза . Но использование тальковой пудры ИМК с разными концентрациями ауксина выявило сортовую специфику при укоренении микрочеренков сливы .

Процесс ризогенеза наиболее интенсивно протекает на модифицированных средах МС и Уайта . По другим данным лучшей средой для корнеобразования являются среды с макроэлементами по Хеллеру с добавлением витаминов и разбавленная вдвое среда МС с пониженным содержанием сахарозы 15 мг/л и с исключением мезоинозита, способствующего образованию каллусной ткани. Однако в большинстве работ для укоренения микропобегов косточковых культур используется среда Мурасиге и Скуга .

Методы микроклонального размножения

Существует несколько способов микроклонального размножения растений in vitro:

Методы размножения пазушными почками;

Методы размножения адвентивными почками;

Непрямой морфогенез;

Соматический эмбриогенез.

Для любого типа регенерации in vitro можно выделить четыре группы факторов, определяющих ее успех: генотип и состояние исходного родительского растения; условия и методы культивирования; состав питательных сред; особенности введения экспланта в стерильную культуру .

Влияние генотипа на эффективность микроразмножения

Наиболее существенное влияние на эффективность микроразмножения оказывает генотип. Реакция растений на условия асептического культивирования зависит от сортовых особенностей и объясняется разной регенераци-онной способностью сортов плодовых и ягодных культур . Например, при использовании метода клонального микроразмножения для ускоренного размножения новых сортов вишни сортовые особенности оказались доминирующими факторами в способности растений к микроразмножению .

Сортовые различия проявлялись как на стадии пролиферации, так и на стадии корнеобразования .

Среди эксплантов разных сортов одного и того же вида плодовых растений нередко наблюдается разная степень проявления реакции на включаемые в среду регуляторы роста, что, видимо, отражает, в какой-то мере эндогенное содержание ростовых веществ, которое является генетически обусловленным признаком вида или сорта . В то же время реализация морфогенетического потенциала в культуре зародышей in vitro, у гибридов между видами Cerasus vulgaris, C. maackii, C. fruticosa, Padus racemosa в основном определялась генотипом и в меньшей степени зависела от состава питательной среды .

Условия культивирования

Еще одним фактором, определяющим успех микроразмножения растений, являются условия их культивирования. Оптимальными условиями культивирования косточковых плодовых культур являются: температура 22-26 °С для вишни, черешни и 26-28 °С - для сливы , освещенность 2000-5000 лк - для вишни, черешни и 3500 лк для сливы при 16-часовом фотопериоде. Микрорастения должны выращиваться в климатических камерах или в комнатах с регулируемым режимом.

Необходимо отметить, что у сортов вишни на этапе пролиферации увеличение коэффициента размножения и повышение доли побегов, пригодных к укоренению, может обеспечить прием чередования минеральных составов питательных сред и использование ламп синего света (ЛП 1) . Большое количество побегов косточковых культур - до 30 - может образовываться при горизонтальной ориентации регенерантов . Для увеличения коэффициента размножения в первых пассажах конгломераты почек и побегов косточковых культур можно не разделять на отдельные единицы, а переносить на свежую питательную среду целиком. При использовании этого приема величина коэффициента размножения резко возрастает и может достигать 40-70 за пассаж в зависимости от сорта .

Методразмножения пазушными почками непрямой морфогенез

Самым надежным методом микроклонального размножения является метод регенерации растений через развитие пазушных почек . Преимущество этого метода состоит в сравнительно быстром размножении исходного генотипа, при этом обеспечивается наиболее высокая фенотипическая и генотипиче-ская стабильность. Потенциальные возможности такого способа микроразмножения in vitro реализуются при добавлении в питательные среды цитокининов, которые подавляют развитие верхушечной почки стебля и стимулируют образование пазушных почек .

В основе процесса микроклонального размножения вишни методом культуры изолированных верхушечных меристем лежит явление снятия апикального доминирования, что способствует последующему развитию уже существующих меристем и обеспечивает генетическую однородность посадочного мате-

риала. Снятие апикального доминирования достигается путем добавления ци-токининов. Для многих сортов вишни характерна высокая митотическая активность апекса, что способствует формированию разветвленного конгломерата почек и боковых микропобегов .

Генетическая стабильность получаемого in vitro материала зависит от модели размножения. Процесс размножения плодовых косточковых растений связан с пролиферацией пазушных меристем. Генетическая стабильность - неотъемлемое свойство меристемы, которое может быть сохранено in vitro, если последняя культивируется в условиях, ингибирующих формирование каллуса. Если используются среды, стимулирующие образование каллуса, то может возникнуть генетическая вариабельность .

Для получения более высоких коэффициентов размножения питательные среды часто обогащают кроме препаратов цитокининовой природы веществами из группы ауксинов, стимулирующими развитие каллусной ткани. Комбинации этих двух препаратов применяют для индукции органогенеза в каллусных тканях. В системе каллус-побег организованная структура побега может воздействовать на процессы органогенеза, стимулируя меристематизацию каллусных клеток, которые могут давать начало органам с измененными свойствами. Простое варьирование содержания регуляторов роста, добавляемых к питательной среде для достижения максимальной пролиферации клеток, может оказывать влияние на генетическую стабильность получаемого материала .

Метод размножения адвентивными почками и непрямой морфогенез

Адвентивными почками называются почки, возникшие непосредственно из тканей и клеток эксплантов растений, обычно их не образующих . Адвентивные (или придаточные) почки образуются из меристемных зон, чаще всего сформированных вторично из тканей каллуса. Адвентивные почки могут возникнуть из меристемы и немеристемных тканей (листьев, стеблей). Образование адвентивных почек у многих видов растений индуцировано высоким отношением цитокининов к ауксинам в питательной среде.

Регенерация побегов, корней или эмбриоидов из соматических растительных клеток экспланта может происходить через непрямую регенерацию - образование каллуса и формирование побегов, или через «прямую» регенерацию, когда клетки экспланта становятся способными к регенерации без формирования каллусных тканей .

Адвентивные побеги могут образовываться на эксплантах листьев, черешков, корней и других органов растений различных видов косточковых и плодовых культур . Получение побегов непосредственно из эксплантов в ряде случаев используют для клонирования растений, но при этом могут появляться генетически нестабильные растения . Поэтому указанный метод регенерации растений можно применять для индукции генетически разнообразных растений.

Побеги-регенеранты могут быть индуцированы из различных частей листовой пластинки, но наибольшей способностью к регенерации обладают ткани

основания листа, поскольку в этой зоне листовой пластинки расположены наиболее активные меристематические клетки. Необходимо также учитывать, что морфогенетический потенциал листьев увеличивается по мере их расположения к верхушке стебля. Придаточные побеги лучше регенерируют из молодой меристематической ткани развивающихся листьев. Однако при использовании более старых листьев значительно чаще возникают генетически измененные побеги .

Для регенерации побегов плодовых косточковых культур, таких как вишня, черешня, персик, абрикос, из исходных эксплантов (целых листьев и их сегментов) используются различные среды: Мурасиге-Скуга (МБ), Ллойда и Мак Коуна (WPM), Драйвера и Куниюки (DKW), Курена и Лепуав-ра (QL) .

Для экспериментов по адвентивной регенерации вишни и черешни чаще всего используется среда Ллойда и Мак Коуна для древесных растений - Woody Plant Medium (WPM), дополненная различными стимуляторами роста . Из цитокининов в основном используют 6-БАП, тидиазурон (TDZ), из ауксинов - НУК , ИМК , 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д) .

Важно отметить, что среди зарубежных исследователей нет единого мнения об эффективности применения в регенерации побегов TDZ по сравнению с БАП, о типе экспланта (целые листья, с нанесенными на них поперечными разрезами или сегментированные) и о способе культивирования экс-плантов (абаксиальной или адаксиальной поверхностью вверх).

Высокий процент регенерации наблюдался у целых листовых эксплантов черешни (с нанесенными на них поперечными разрезами вдоль центральной жилки листа), которые помещали абаксиальной (нижней) поверхностью вверх на среду WPM, дополненную 2,27 или 4,54 |М TDZ + 0,27 |М НУК .

С другой стороны, в работе показано, что БАП более эффективен, чем TDZ, в регенерации растений из листьев вишни и черешни а также то, что БАП и НУК в концентрации 2 мг/л и 1мг/л являются оптимальной комбинацией регуляторов роста растений вишни и черешни. Наибольшая частота регенерации была получена на среде WPM, хотя она стимулировала каллусогенез больше, чем среды MS, QL, DKW. Выявлена зависимость эффективности каллусообра-зования от типа листовых сегментов. Так, наиболее высокие показатели каллу-сообразования отмечены на средних листовых сегментах; наиболее низкие - на верхушечных сегментах и прямая регенерация (без образования каллуса) отмечена на базовых сегментах.

Адвентивная регенерация вишни черной (Prunus serótina Ehrh.) происходила чаще при культивировании эксплантов листьев на среде WPM, дополненной TDZ по сравнению с модифицированной средой DKW .

На эффективность адвентивной регенерации дикой вишни (Prunus avium L.) существенное влияние оказывал размер экспланта. Результаты показали, что размер листового экспланта имеет критическое значение для образования адвентивных побегов, листья длиной 3-5 мм формировали наибольшее число адвентивных побегов. Для адвентивной регенерации дикой вишни использовалась среда WPM, дополненная 0,54 тМ НУК и 4,4 тМ TDZ .

Специальная предварительная обработка до культивирования (замачивание с добавлением 5 мг/л 2,4-Д в течение одного дня) оказалась эффективной для индукции адвентивных побегов из листовых эксплантов черешни . Последующее культивирование эксплантов листьев на регенерационной агаризо-ванной среде WP, дополненной 5 мг/л TDZ, повышало эффективность адвентивной регенерации черешни. Молодые листовые экспланты черешни показали более высокую способность к регенерации, чем старые.

Необходимо отметить существенное влияние этиленовых ингибиторов на адвентивную регенерацию листьев различных сортов абрикоса. Например, в работе было показано, что применение этиленовых ингибиторов (тиосульфата серебра или аминоэтоксивинилглицина) совместно с низким содержанием канамицина увеличивает адвентивную регенерацию более чем на 200%. Использование чистого агара также улучшало регенерацию из листьев абрикоса по сравнению с использованием агар-геля или агарозы. В данной работе исследования проводились на средах LQ, DKW, дополненные TDZ и НУК. Способ культивирования листьев - адаксиальной поверхностью к среде.

Итальянскими исследователями был разработан метод адвентивной регенерации из целых листьев персика, которые инкубировались в темноте на средах, дополненных 6-БАП и НУК. В исследованиях использовались комбинации макросолей и микросолей различных сред по MS, Quoirin, Rugini и Muganu, оба цитокинина - 6-БАП и TDZ, а также способ культивирования листьев - адаксиальной поверхностью в контакте с регенерационной средой. В основании черешков листьев развивался каллус. Адвентивные побеги появлялись на этом каллусе после переноса на среду, не содержащую ауксин, и культивирования на свету. Морфогенетическая способность каллуса сохранялась в течение нескольких месяцев. В данных исследованиях адвентивные побеги персика появлялись путем непрямого морфогенеза.

Непрямой морфогенез включает вторичную дифференциацию почек из каллусных тканей. Для образования каллуса, из которого затем формируются побеги, используют разнообразные экспланты. Для получения морфогенного каллуса у многолетних растений следует брать верхушки побегов или выделенные из них участки меристематических тканей. Такая система не рекомендуется для микроклонального размножения растений in vitro из-за генетической нестабильности. Непрямой морфогенез имеет значение для изучения сомаклональ-ной изменчивости и получения сомаклональных вариантов .

В Великобритании, в отделе физиологии экспериментальной станции Мейдстон, изучалась регенерация растений из стеблевого и листового каллуса у подвоя черешни Кольт. Инициацию каллуса осуществляли на среде Му-расиге-Скуга, содержащей 2,0-10,0 мг/л НУК. Образовавшийся каллус переносили на среду для регенерации, которая содержала БАП в концентрации 0,5 мг/л. Удалось осуществить регенерацию побегов из каллусов у данного подвоя черешни .

В Центральной генетической лаборатории имени И. В. Мичурина в культуре пассированных каллусных тканей, полученных из однолетних побегов вишни, отмечалось корнеобразование. При пересеве на среду с регуляторами роста наблюдалось появление меристематических образований .

Соматический эмбриогенез

Еще одним методом микроклонального размножения растений in vitro является соматический эмбриогенез - процесс формирования зародышеподоб-ных структур из соматических (неполовых) клеток. Соматический зародыш - независимая двухполюсная структура, физически не прикрепленная к ткани, из которой образуется структура, в которой одновременно развиваются апексы стебля и корня.

Образование соматических зародышей в культуре клеток, тканей и органов может происходить прямым или непрямым путем. Прямой соматический эмбриогенез - формирование вегетативного зародыша из одной или нескольких клеток ткани экспланта без стадии образования промежуточного каллуса. Непрямой эмбриогенез состоит из нескольких этапов: помещение экспланта в культуру, последующая стимуляция роста каллуса и формирование из каллус-ных клеток предзародышей, перенос каллуса на питательную среду без факторов роста для формирования биполярных зародышей из предзародышей .

В работе исследовалась возможность регенерации растений из каллусов, полученных из корней подвоев вишни. Каллус получали либо из срезанных корешков, либо из целых растений, выращенных в стерильных условиях при микроклонировании побегов вишни. У подвоя вишни Кольт каллус, полученный из корней интактных растений, образовывал побеги и эмбриоидо-подобные структуры. Каллусы вишни культивировали на среде Мурасиге-Скуга, дополненной БАП, ГК и НУК. Частота образования побегов была выше, чем у анализированной параллельно яблони. Растения-регенеранты были размножены через культуру тканей и пересажены в почву. Саженцы растений-регенерантов, полученные из каллусов подвоя вишни по фенотипу, не отличались от исходных подвоев.

Индукцию соматического эмбриогенеза у сортов вишни (Prunus cerasus L.) наблюдали при культивировании эксплантов на среде Мурасиге-Скуга, дополненной различными комбинациями ауксинов и цитокининов . Соматический эмбриогенез в основном происходил, когда использовали комбинацию 2,4-Д и кинетин. Индукция соматического эмбриогенеза также отмечена при добавлении 0,1 мг/л ИМК в индуктивную среду. Использование НУК или 6-БАП уменьшало индукцию соматического эмбриогенеза и увеличивало частоту непрямой регенерации у сортов вишни (Prunus cerasus L.).

На сегодняшний день самым надежным способом получения генетически идентичного потомства считается микроклональное размножение плодовых косточковых культур пазушными почками по сравнению с соматическим эмбриогенезом, размножением адвентивными почками и непрямым морфогенезом.

1. Полевой В. В., Чиркова Т. В., Лутова Л. А. и др. Практикум по росту и устойчивости растений: Учебное пособие. СПб., 2001. С. 208.

2. Сорокина И. К., Старичкова Н. И., Решетникова Т. Б., Гринь Н. А. Основы биотехнологии растений. Культура растительных клеток и тканей: Учебное пособие. 2002. С. 45.

3. Чернец А. М., Абраменко Н. М., Стаканова Р. В. Разработка метода длительного хранения in vitro безвирусных клонов плодовых пород и земляники // Тезисы докладов международной конференции: Биология культивируемых клеток и биотехнология. Новосибирск, 1988.

4. Романова Н. П., Ульянова Е. К. К вопросу о хранении мериклонов земляники in vitro // Научно-технический бюллетень Научно-исследовательского института растениеводства имени Н. И. Вавилова. Л., 1990. Вып. 204. С. 75-79.

5. Орлова С. Ю. Биологические особенности и селекционная ценность сортов вишни в условиях северо-запада России: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. СПб., 2002. С. 20.

6. Niino Takao, Tashiro Kazuo, Suzuki Mitsuteru, Ohuchi Susumu, Magoshi Jun, Akihama Tomoya. Cryopreservation of in vitro grown shoot tips of cherry and sweet cherry by one-step vitrification // Scientia Horticulturae. 1997. Vol. 70. P. 155-163.

7. Высоцкий В. А. Культура изолированных тканей и органов плодовых растений: оздоровление и микроклональное размножение // Сельскохозяйственная биология: Ежемесячный научно-теоретический журнал. М., 1983. № 7. С. 42-47.

8. Фаустов В. В., Олешко Е. В, Жаркова И. В., Асадулаев З. М., Шарафутдинов Х.

B., Исмаил Х. Микроклональное размножение вишни // Известия ТСХА. М., 1988. Выпуск 5. С. 131-148.

9. Биотехнология растений: культура клеток // Пер. с англ. В. И. Негрука / Под ред. Р. Г. Бутенко. М., 1989. С. 233.

10. Деменко В. И., Трушечкин В. Г. Размножение вишни методом in vitro // Сельскохозяйственная биология: Ежемесячный научно-теоретический журнал. М., 1983. № 7.

11. Кашин В. И., Борисова А. А., Приходько Ю. Н., Суркова О. Ю., Упадышев М. Т. и др. Технологический процесс получения безвирусного посадочного материала плодовых и ягодных культур: Методические указания. М., 2001. С. 97.

12. Шипунова А. А. Клональное микроразмножение плодовых растений: Автореф. дис. ... канд. сельскохозяйственных наук. М., 2003. С. 24.

13. Трушечкин В. Г, Высоцкий В. А., Олешко Е. В. Микроклональное размножение сортов и подвоев косточковых культур: Методические указания. М., 1983. С. 16.

14. Lane W. D. Regeneration of pear plants from shoot meristemtips // Plant Sci. Letters. 1979. Vol. 16. № 2/3. Р. 337-342.

15. FossardR. A., Bourne R. A. Reducing tissue culture costs for commercial propagation // Tissue culture for horticultural purposes. Acta Hort. 1977. Vol. 78. Р. 37-44.

17. Олешко Е. В. Особенности клонального микроразмножения подвоев и сортов вишни: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. М., 1985. С. 15.

18. Хаак Э. Р., Нууст Ю. О. Клональное микроразмножение косточковых культур // Садоводство и виноградарство. М., 1989. № 1. С. 27-29.

19. Дудченко О. П. Регенерация в культуре изолированных меристем сливы // Тезисы докладов Международной конференции «Биология культивируемых клеток и биотехнология 2». Новосибирск, 1988. С. 358.

20. Корнацкий С. А., Высоцкий В. А., Трушечкин В. Г. Проблемы клонального микроразмножения косточковых культур // Достижения в плодоводстве в Нечерноземной зоне РСФСР: Сб. науч. трудов. М., 1991. С. 104-116.

21. Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур: Методические рекомендации / Под ред. В. Е. Перфильева. 1996. С. 73.

22. Свитайло А. М., Бондаренко П. Е., Шевчук Н. С. Клональное микроразмножение подвоев и сортов плодовых культур // Тезисы докладов Международной конференции «Биология культивируемых клеток и биотехнология 2». Новосибирск, 1988. С. 346.

23. Трушечкин В. Г., Высоцкий В. А., Корнацкий С. А. Клональное микроразмножение косточковых культур в системе производства оздоровленного посадочного материала // Тезисы докладов Международной конференции: Биология культивируемых клеток и биотехнология 2. Новосибирск. 1988. С. 319-320.

24. Hammatt N., Grant N. J. Micropropagation of mature British wild cherry // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1997. Vol. 47. P. 103-110.

25. Джигадло М. И. Использование биотехнологических и биофизических методов в селекции и сорторазведении плодовых и ягодных культур: Автореф. дис. ... канд. сельскохозяйственных наук. Мичуринск, 2003. С. 25.

26. Ruzic D., Saric M., Cerovic R., Culafic I. Relationship between the concentration of macroelements, their uptake and multiplication of cherry rootstock Gisela 5 in vitro // Plant Cell Tissue Organ Cult. 2000. Vol. 63. P. 9-14.

27. Корнацкий С. А. Особенности клонального микроразмножения сливы в системе оздоровленного посадочного материала: Автореф. дис. ... канд. сельскохозяйственных наук. М., 1991. С. 24.

28. Джигадло М. И., Джигадло Е. Н. Размножение вишни методом верхушечных меристем // Улучшение сортимента и прогрессивные приемы возделывания плодовых и ягодных культур: Сборник. Тула, 1988. С. 65-68.

29. Высоцкий В. А., Олешко Е. В. Совершенствование питательной среды для кло-нального микроразмножения вишни // Агротехника и сортоизучение плодовых культур: Сб. науч. трудов. М., 1985. С. 72-76.

30. Чернец А. М. Влияние минерального питания на интенсивность пролиферации сортов вишни in vitro // Тезисы докладов Международной конференции «Биология культивируемых клеток и биотехнология 2». Новосибирск, 1988. С. 343.

31. Неделчева С., Ганева Д. Размножение in vitro на три вегетативни подложки от рода Prunus // Растен. науки. 1985. Т. 22. № 8. С. 98-104.

32. Boleriola-Lucas C., Millins M. G. Micropropogatiоn of two French prune cultiwars (Prunus domesticaL.) // Agronomie. 1984. Vol. 4. № 5. Р. 473-477.

33. Высоцкий В. А., Олешко Е. В. Использование микропрививок при клональном микроразмножении косточковых культур // Сельскохозяйственная биология. М., 1988. № 4. С. 75-77.

34. Плаксина Т. В. Использование биотехнологии в селекции вишни на Алтае // Мат-лы научно-практической конференции, посвященной 70-летию НИИСС им. М. А. Ли-савенко: Проблемы устойчивого развития садоводства Сибири. Барнаул, 2003. С. 108-110.

35. Высоцкий В. А. Действие некоторых регуляторов роста на изолированные мери-стематические верхушки черной смородины // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы: Сборник. М. 1979. Том IX. С. 101-107.

36. ЛутоваЛ. А. Биотехнология высших растений: Учебник. СПб., 2003. С. 227.

37. Высоцкий В. А. О генетической стабильности при клональном микроразмножении плодовых и ягодных культур // Сельскохозяйственная биология. 1995. № 5. С. 57-63.

38. De Klerk G. -J. Arnholdt-Schmitt B., Lieberei R. Regeneration of roots, shoots and embryos: physiological, biochemical and molecular aspects // Biologia Plantarum. Vol. 39. № 1. 1997. Р. 53-66.

39. Tang H., Ren Z., Reustle G., Krczal G. Plant regeneration from leaves of sweet and sour cherry cultivars // Scientia Horticulturae. 2002. Vol. 93. P. 235-244.

40. Bhagwat B., David Lane W. In vitro shoot regeneration from leaves of sweet cherry (Prunus avium) "Lapins" and "Sweetheart // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. Netherlands. 2004. Vol. 78. P. 173-181.

41. Gentile A., Monticelli S., Damiano C. Adventitious shoot regeneration in peach // Plant Cell Reports. 2002. Vol. 20. P. 1011-1016.

42. Takashina T., Nakano H., Kato R. Efficient plant regeneration culture from leaf explants of in vitro-grown sweet cherry // Acta Horticulturae: XXVI International Horticultural Congress: Genetics and Breeding of Tree Fruits and Nuts. Р. 622.

43. Burgos L., Alburquerque N. Ethylene inhibitors and low kanamycin concentrations improve adventitious regeneration from apricot leaves // Plant Cell Reports. 2003. Vol. 21. P. 1167-1174.

44. Hammatt N., Grant N. J. Shoot regeneration from leaves of Prunus serotina Ehrh. (black cherry) and P. avium L. (wild cherry) // Plant Cell Reports. 1998. Vol. 17. P. 526-530.

45. Grant Neil J., Hammatt Neil. Adventitious shoot development from wild cherry (Prunus avium L.) leaves // New Forests. Netherlands. 2000. Vol. 20. P. 287-295.

46. James D. E., Pоssеу A. J., Ma1hоtrо S. B. Organogenesis in callus derived from stem and leaf tissues of apple and cherry rootstocks // Plant Cell Tissue Organ Cult. 1984. Vol. 3. № 4.

47. Тюленев В. М., Нафталиев Н. М., Осипова Л. В., Расторгуев С. Л. Клональное микроразмножение ценных генотипов плодовых культур // Тезисы докладов Международной конференции «Биология культивируемых клеток и биотехнология 2». Новосибирск, 1988. С. 320.

48. Jones O. P., Jacqueline A. Gayner and Watkins R. Plant regeneration from callus tissue cultures of the cherry rootstook Colt (Prunus avium x P. pseudocerasus) and the apple root-stook M. 25 (Malus pumila) // The Journal of Horticultural Science. England. 1984. Vol. 59. № 4. P. 463-467.

49. Tang Haoru, Ren Zhenglong, Krczal Gabi. Somatic embryogenesis and organogenesis from immature embryo cotyledons of three sour cherry cultivars (Prunus cerasus L.) // Scientia Horticulturae. 2000. Vol. 83. P. 109-126.

V. Rogovaia, M. Gvozdev

IN VITRO CLONAL MICROPROPAGATION OF STONE-FRUIT CULTURES

The review is focused on principal stages and methods of in vitro clonal micropropagation of stone-fruit cultures. Special emphasis is laid on auxiliary bud propagation technique and method of adventitious shoot regeneration from leaf explants of sour cherry, cherry, peach and apricot. Some aspects ofplant material testing for virus infections have been reviewed as well as certain problems of genetic stability preservation depending on propagation model.

Для экспериментов в условиях in vitro использована цельная кровь 11 клинически здоровых людей-добровольцев и 36 больных с термической травмой.

2.3. Методы исследования

2.3.1. Иммунологические методы исследования

2.3.1.1. Оценка спонтанной и индуцированной секреторной активности мононуклеаров периферической крови в условиях in vitro

Объектом исследования служила венозная кровь, взятая у здоровых людей-добровольцев и у больных с термической травмой натощак, в утренние часы. Кровь стабилизировали гепарином из расчета 10 ЕД/мл. Фракцию мононуклеаров выделяли по методу на градиенте плотностью 1,077 г/мл при центрифугировании (400 g 45 минут) с использованием фиколла и верографина. Для формирования среды плотностью 1,077 г/см 3 использовали 9% (масса/объем) раствор фиколла-400 («ДиаМ», Москва) и 60 % официнальный урографин («Schering», Германия). Опалесциирующее кольцо мононуклеаров забирали из интерфазы пастеровской пипеткой и трижды центрифугированием отмывали средой 199 путем при 689g в течение 5-7 минут. Отмытые и ресуспендированные клетки доводили до концентрации 1 10 7 клеток/мл. Их жизнеспособность оценивали путем окраски их 0,2 % раствором трипанового синего, жизнеспособность составляла не менее 98%.

Культивирование клеток проводили при 5% содержании углекислого газа в воздушной среде при температуре 37 0 С в течение 1 часа. В стерильных условиях содержание ячеек было аспирировано, с последующим двухкратным промыванием от неприлипших клеток раствором Хенкса. Затем в каждую ячейку добавляли по 250 мкл 10 % эмбриональной телячьей сыворотки и 80 мкг/мл гентамицина. Далее клетки культивировали в течение 72 часов, в условиях термостата при 5% содержания углекислого газа в воздушной среде, при температуре 37 0 С, в супернатанте определяли концентрацию цитокинов.

2.3.1.2. Исследование врожденного иммунитета

Определение количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы. Количество лейкоцитов в периферической крови определяли общепринятым меланжерным методом в камере Горяева. Лейкоцитарную формулу подсчитывали в мазках крови, фиксированных метиловым спиртом и окрашенных азур II-эозином по Романовскому-Гимзе . Подсчитывали 200 лейкоцитов с дифференциацией эозинофилов, базофилов, метамиелоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов. Их количество выражали в относительных (%) и абсолютных ( 10 9 /л) величинах.

Функциональную активность фагоцитов исследовали по показателям НСТ-теста и фагоцитозу.

Исследование поглотительной способности фагоцитов периферической крови проводили на модели поглощения частиц латекса. Для оценки фагоцитоза 200 мкл крови смешивали с 20 мкл взвеси частиц монодисперсного (диаметр 1,7 мкм) полистерольного латекса. После 60 минут инкубации при температуре 37 0 С из суспензии готовили препараты, которые высушивали, фиксировали метанолом и окрашивали азур II – эозином по Романовскому-Гимзе. С помощью иммерсионной микроскопии учитывали активность фагоцитоза – % клеток, захвативших хотя бы одну частицу латекса, интенсивность фагоцитоза – число поглощенных микросфер латекса в 100 подсчитанных клетках и фагоцитарное число – число поглощенных микросфер латекса на один фагоцит.

НСТ-тест проводили, учитывая интенсивность восстановления фагоцитами нитросинего тетразолия (НСТ) в его нерастворимую форму - диформазан по методу А.Н. Маянского и М.Е. Виксмана (1979). Проводили спонтанный и индуцированный НСТ-тест.

В пробирки с 0,2 мл крови добавляли 0,1 мл 0,2% раствора стандартно разведенного нитросинего тетразолия в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4). Для оценки индуцированного НСТ-теста в каждую лунку добавляли 20 мкл суспензии частиц монодисперсного (диаметр 1,7 мкм) полистерольного латекса (индуцированная серия) или 20 мкл 0,9% NaCl (спонанная серия). После 30-минутной инкубации при температуре 37 0 С к реакционной смеси добавляли 3 мл 0,1 % соляной кислоты для остановки реакции. Пробирки центрифугировали при 1000 об./мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость сливали, из осадка готовили мазки. После сушки препараты фиксировали метанолом и 5минут окрашивали 0,1% водным раствором сафранина. С помощью микроскопии при увеличении 90х10х1,5 определяли % клеток, восстанавливающих НСТ, и интенсивность реакции по активности восстановления НСТ, для чего НСТ-позитивные клетки делили на 3 группы:

1 – клетки с гранулами диформазана в цитоплазме общей площадью менее 1/3 площади ядра;

2 – клетки с гранулами диформазана в цитоплазме более 1/3 площади ядра;

3 – клетки с гранулами диформазана, превышающими размеры ядра.

Для получения коэффициента интенсивности реакции количество клеток первой группы, выраженное в процентах, умножали на 1, второй группы – на 2, третьей – на 3, результаты суммировали и делили на 100.

  • Специальность ВАК РФ06.01.08
  • Количество страниц 408

Совершенствование технологии ускоренного размножения винограда методом in vitro

Введение.

Глава 1. Культура изолированных тканей и органов растений in vitro (обзор литературы).

1.1. История развития метода in vitro и области его применения.

1.2. Основные методы клонального микроразмножения растений (in vitro).

1.2.1. Индукция пролиферации пазушных меристем

1.2.2. Развитие адвентивных побегов из ткани экспланта.

1.2.3. Регенерация растений из каллуса.

1.3. Основные этапы клонального микроразмножения растений in vitro.

1.3.1. Регенерация растений из апикальной меристемы.

1.3.2. Укоренение микропобегов.

1.4. Освобождение растений от вирусных заболеваний.

1.5. Факторы, влияющие на процесс регенерации и клональное микроразмножение in vitro.

1.6. Адаптация растений при пересадке в нестерильные условия

1.7. Хранение пробирочных растений.

Глава 2. Цель, задачи, объект, методика и условия проведения исследований.

2.1. Цель и задачи исследований.

2. 2. Объект исследований.

2. 3. Организация и методика проведения работы.:.

2.3.1. Подготовка и стерилизация исходного материала.

2.3.2. Приготовление питательных сред.

2.3.3. Работа в стерильном боксе.

2.3.4. Условия культивирования.

2.4. Элементы учетов и методы обработки полученных данных.

Глава 3. Введение эксплантов винограда в культуру in vitro и их развитие на этапе микроразмножения.

3.1. Введение в культуру in vitro.

3.2. Регенерация растений из апикальной меристемы.

3.3. Влияние минерального состава питательной среды на развитие эксплантов винограда.

3.4. Влияние регуляторов роста на развитие эксплантов винограда в условиях in vitro.

3.4.1. Фаза удлинения побегов.

3.4.2. Этапы укоренения побегов винограда in vitro

Глава 4. Адаптация растений винограда in vitro при пересадке в нестерильные условия in vivo.

4.1. Адаптация растений винограда в условиях in vitro.

4.2. Адаптация растений винограда в условиях in vivo.

4.2.1. Перевод пробирочных растений в нестерильные условия

4.2.2. Влияние температуры, света и влажности воздуха при адаптации растений полученных in vitro.

4.2.3. Изучение возможности значительного повышения коэффициента размножение винограда.

4.2.4. Применение регуляторов роста в период адаптации растений винограда в условиях in vitro (сосуд-пакетах).

4.3. Доведение растений винограда, размноженных методом in vitro, до стандартных саженцев в условиях теплицы.ИЗ

Глава 5. Иммуноферментный анализ на содержание вирусов в растениях винограда, размноженных методом in vitro, и определение вирусоносителей на участках, планируемых под микроматочники новых сортов винограда.

5.1. Тестирование посадочного материала винограда полученного методом in vitro на наличие вирусных заболеваний.

5.2. Определение вирусоносителей на участках, планируемых под микроматочники новых сортов винограда.

5.2.1. Методика отбора средней пробы почвы для выявления почвенных нематод.

5.2.2. Методика приготовления препаратов.

Глава 6. Воздействие цеолитовых субстратов на укоренение, рост и развитие растений винограда при микроклональном размножении

6.1. Применение природных цеолитов в сельском хозяйстве

6.2. Цель и задачи, материал и методика проведения исследований.

6.3. Определение оптимального гранулометрического состава фракций цеолитового субстрата.

6.4. Влияние цеолита на укоренение, рост и развитие растений в условиях in vitro.

6.5. Влияние цеолита на укоренение, рост и развитие растений винограда в условиях выращивания сосуд-пакетах

6.6. Применение цеолита при доращивании растений in vitro в условиях защищенного грунта

6.7. Изучение водного режима, физических свойств субстратов и водообеспечение растений винограда.

Глава 7. Переход на промышленную основу производства посадочного материала винограда методом in vitro.

7.1. Производство посадочного материала винограда в лаборатории in vitro.

7.2. Адаптация посадочного материала винограда в условиях in vivo.

7.3. Закладка микроматочников новыми перспективными, оздоровленными сортами винограда.

Глава 8. Обсуждение результатов исследований.

ЧАСТЬ ВТОРАЯ Реакция семенных сортов винограда различных эколого-географических групп на применение гиббереллина

Введение.

Глава 1. Роль гиббереллинов в регуляции роста и плодоношения виноградного растения и перспективы его использования в производстве (обзор литературы).

1.1. Гиббереллины, их роль и место в гормональном комплексе виноградного растени.

1.2. Отзывчивость различных сортов винограда на обработку гиббереллином.

1.3. Практическое использование гиббереллина в технологическом комплексе возделывания виноград

Глава 2. Цель, задачи и методика проведения исследований.

2.1. Место проведения опытов, цель и задачи.

2.2. Объект исследований и схема опытов.

2.3. Элементы учета и наблюдений.

Глава 3. Влияние гиббереллина на продуктивность, качество и вегетативные органы семенных сортов винограда.

3.1. Структура урожая винограда.

3.2. Влияние гиббереллина на рост и развитие ягод и семян винограда

3.3. Физиологические и биохимические показатели.

3.4. Динамика роста побегов различных сортов винограда при обработке их гиббереллином и его влияние на конечный прирост и вызревание лозы.

3.5. Влияние гиббереллина на динамику роста листьев.

3.6. Особенности анатомического строения семенных сортов винограда, обработанных гиббереллином.

3.7. Показатели характера перезимовки и плодоносности кустов винограда семенных сортов при применении гиббереллина.

Рекомендованный список диссертаций

  • Биотехнологические методы ускоренного размножения и оздоровления, селекции бессемянных сортов и создания коллекций генофонда винограда 1999 год, доктор сельскохозяйственных наук Дорошенко, Наталья Петровна

  • Влияние регуляторов роста на урожайность и качество продукции бессемянного сорта винограда Кишмиш черный в условиях Узбекистана и перспективных сортов в условиях Краснодарского края 2002 год, кандидат сельскохозяйственных наук Перелович, Виктор Николаевич

  • Клональное микроразмножение садовых растений 2003 год, кандидат сельскохозяйственных наук Шипунова, Анна Аркадьевна

  • Обоснование приемов световой биотехнологии при клональном микроразмножении винограда 2004 год, кандидат биологических наук Соболев, Андрей Александрович

  • Гормональная регуляция продуктивности и качества винограда в условиях Южного Дагестана 2005 год, кандидат сельскохозяйственных наук Агаханов, Альберт Халидович

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование технологии ускоренного размножения винограда методом in vitro и применение регуляторов роста в условиях in vitro и in vivo»

Виноград - одна из самых распространенных сельскохозяйственных культур, играющая существенную роль в мировой экономике.

Как свидетельствует мировой опыт, основной тезис научно-технического прогресса заключается в том, что только решение вопросов, имеющих большое научное значение, приводит в конечном итоге и к большому экономическому эффекту. В этом аспекте наиболее перспективными являются пути и методы БИОТЕХНОЛОГИИ - науки, возникающей на стыке нескольких биологических дисциплин: генетики, вирусологии, микробиологии и растениеводства.

Увеличение производства винограда требует не только расширения площадей, но и разработка и совершенствование технологий, обеспечивающих ускоренное размножение перспективных сортов, повышение урожайности виноградных насаждений.

Во многих странах мира большое значение в настоящее время придается внедрению в производство интенсивных методов производства высококачественного посадочного материала винограда и разработке новых высокоэффективных способов закладки виноградников.

Рост и урожайность винограда, срок вступления в плодоношение во многом зависят от качества посадочного материала.

В настоящее время биотехнология стремительно выдвигается на передний край научно-технического прогресса. Этому способствуют два обстоятельства. С одной стороны, бурное развитие современной молекулярной биологии и генетики, опирающихся на достижения химии, физики, что позволило использовать потенциал живых организмов в интересах хозяйственной деятельности человека. С другой стороны, острая практическая потребность в новых технологиях, призванных ликвидировать нехватку продовольствия, энергии, минеральных ресурсов.

Как наука биотехнология молода, развитие ее стремительно. Поток информации иногда противоречив или доступен лишь узким специалистам.

За последние двадцать лет значительно расширились и углубились исследования по проблеме культуре тканей многих сельскохозяйственных растений, в том числе и винограда. Их направленность преследует разные цели: вскрытие потенциальных особенностей тех или иных тканей к регенерации; поиск путей индуцирования морфо- и органогенеза в каллусе; попытка получения гаплоидных растений из меристемного апекса или верхушек побегов после фитосанитарной термотерапии; микроклонирование (микроразмножение) как способ исключительно быстрого и весьма эффективного вегетативного размножения в асептических условиях. В последнем случае микроразмножение служит сокращению длительности селекционного процесса и ускорению внедрения новых сортов в производство.

Из-за недостаточной производительности существующих методов размножения посадочного материала продвижение в производство новых сортов затягивается на десятилетия. С учетом этого назрела необходимость разработки и внедрения новых методов размножения сортов винограда. Одним из эффективных способов решения проблемы является технология клонального микроразмножения винограда.

Актуальной проблемой настоящего времени является сокращение или прекращение использования химических веществ в борьбе с болезнями, вредителями и сорной растительностью с целью охраны окружающей среды от загрязнения за счет использования биологических и агротехнических методов борьбы, внедрения сортов, устойчивых к болезням и вредителям, не требующих химических средств борьбы. Поэтому особый интерес представляют сорта технического и столового направления, отличающиеся повышенной устойчивостью к болезням (мильдью, оидиум, серая гниль, антрокноз и др.) и морозам. И это понятно. Ведь возделывание винограда комплексно-устойчивых сортов выгодно как экономически (меньше затрат труда и средств), так и экологически (продукция без ядохимикатов).

Однако отсутствие посадочного материала накладывает свой отпечаток на глобальное решение вышеуказанных проблемных вопросов, то есть обычная технология размножения винограда не отвечает требованиям времени, не может в короткие сроки обеспечить виноградарские хозяйства комплексно-устойчивыми и хозяйственно ценными сортами винограда.

Одно из существующих препятствий на пути внедрения нового сорта в практику - невозможность получения в течение одного сезона большого количества посадочного материала для вегетативного размножения. Это препятствие может быть устранено за счет использования достижений биотехнологии, которая предлагает селекционерам эффективный и быстрый метод микроразмножения растений. Очень важно и то, что псадочный материал, получаемый этим путем, генетически идентичен давшему ему начало материнскому растению.

В виноградарстве клональное размножение - получение ряда следующих друг за другом поколений генетически однородных организмов в результате вегетативного размножения от одного общего материнского организма - является традиционным. При клональном микроразмножении указанная традиция сохраняется, но значительно повышается коэффициент вегетативного размножения за единицу времени, при одновременном сокращении занимаемой площади питомников.

Клональное микроразмножение имеет ряд и других преимуществ и особенностей, а именно: проводится в лабораторных условиях, что исключает влияние различных факторов окружающей среды; имеет высокий коэффициент размножения; позволяет производить оздоровленный от вирусов и бактериального рака посадочный материал; позволяет производить размножение растений круглогодично и на потоке; появляется возможность размножать сорта, которые плохо укореняются обычным способом; получать с единицы площади максимальное количество растений; при размножении исключается возможность перезаражения растений; при интродукции растений устраняется вероятность завоза и распространения карантинных объектов; позволяет длительно хранить растения, находящиеся в пробирках, при соответствующих условиях; дает возможность селекционерам сохранить требуемый генофонд; ускоренно размножать новые сорта и клоны для передачи их в ГСУ и создавать в хозяйствах микроматочники интенсивного типа; имеет большое природоохранное и ресурсосберегающее значение.

Наиболее существенные результаты диссертации, их новизна выражаются в следующем: установлены оптимальные концентрации растворов регуляторов роста (ИМК, 6-БАП, ПС, 2-iP, ДРОП), их влияние на развитие эксплантов в условиях in vitro, а также на укоренение, рост и развитие растении, в период их адаптации и выгонки в условиях in vivo; впервые для адаптации и выгонки пробирочных растений изучены и рекомендованы субстраты из цеолитов Тедзаминского месторождения; впервые изучен и рекомендован метод адаптации в широких пробирках, который позволяет в весенний период высаживать растения in vitro непосредственно в теплицу, минуя промежуточный этап адаптации в сосуд пакетах; на этапе дополнительного повышения коэффициента размножения в условиях in vivo (в сосуд-пакетах) изучено и рекомендовано использовать перлит двухразового обжига; впервые проведены широкомасштабные исследования на наличие вирусоносителей на участках планируемых под закладку маточников оздоровленным посадочным материалом винограда и установлено, что из трех выбранных для закладки в них маточников, в госхозе «Гребенской» имеются вирусоносители Xiphinema index и Longidorus elongatus; проведенный нами анализ на наличие вирусов в растения полученных методом in vitro по методу Elisa teste показал, что в растениях оздоровленных в условиях in vitro в них вирус отсутствует; впервые проведено агробиологическое, цитоэмбриологическое и хозяйственно-технологическое изучение влияния гиббереллина при сплошном опрыскивании основных столовых и столово-винных сортов винограда и установлена возможность и целесообразность применения приема механизированной обработки сортов винограда с функционально-женским типом цветка, обеспечивающих увеличение рентабельности на 27,4%; в результате испытания гиббереллина на семенных сортах винограда установлено, что характер действия препарата на виноградное растение зависит от принадлежности сортов к различным эколого-географическим группам, биологических их особенностей, концентрации раствора препарата и срока обработки.

После распада СССР роль виноградарства Северного Кавказа, как единственной зоны возделывания винограда в Российской Федерации, значительно возросла.

Для дальнейшего развития виноградарства жизненно важным является реконструкция насаждений. Обусловлено это несколькими причинами. Одна из них заключается в том, что возделываемые в настоящее время сорта малопригодны для индустриальной технологии (неустойчивы к морозам и болезням, малотранспортабельны и непригодны для длительного хранения). Около 75% насаждений в Чеченской Республике приходится на технический сорт Ркацители, поэтому работы, проводимые по ускоренному размножению винограда методом in vitro являются актуальными как для Чеченской республики, так и для всей зоны виноградарства юга Росии.

На основе совершенствованной нами технологии in vitro, полученный посадочный материал реализовывали хозяйствам Чеченской республики, Дагестанской республики и Ростовской области. Таким образом, созданы микроматочники новых перспективных сортов винограда, в госхозах Чеченской Республики: «Восточный», «Авангард», «Советская Россия», в ОПХ «Гикаловское», в Дагестанской Республике госхозе «Аксай», в Ростовской облаете госхозе «Краснодонский». А также переданы на госсортоиспытательный участок, расположенный в совхозе «Бурунный», для прохождения испытаний следующие сорта: Кодрянка, Агат донской, Виорика, Кишмиш лучистый, Подарок Магарача, Лакхеди мезеш, Юбилей Журавля, Мускат янтарный.

Учитывая длительность прохождения государственного испытания новых сортов винограда, лаборатория тканевой культуры отдела виноградарства позволит сократить срок передачи остродефицитных сортов и клонов винограда в хозяйства в 10 раз (с 20.25 лет до 2.3 лет), создать маточники высоких производственных категорий.

Проходя стажировку в ведущих странах мира по производству и переработке винограда, такие как Франция, Италия, Испания, США, Австралия и др. (всего 16 стран мира), автор знакомился с новейшими технологиями размножения и культивирования винограда, в том числе размножение винограда методом in vitro.

Во Франции основные исследования по in vitro винограда проводятся в лабораториях тканевой культуры Национального научно-исследовательского института в Монпелье под руководством профессора Boubals D. и на Национальной (Государственной) опытной станции по оздоровлению, которая расположена на юге Франции на прибрежных песках Средиземного моря, под руководством профессора Grenan S. Основные направления научных работ:

Оздоровление и размножение методом in vitro посадочный материал винограда,

Координация всех научно-исследовательских работ в стране по санитарной и клеточной селекции,

Прививка винограда в условиях in vitro и изучение совместимости различных привоев с подвоем,

Создание базовых маточников, размножение и распространение оздоровленного посадочного материала винограда по всей стране.

В Испании в Научно-исследовательском институте Агробиологии исследователями Martinez M.C.R. и Mantilla J.L.G. проводятся исследования по вопросам сохранения генотшшческой стабильности у растений, размноженных в культуре изолированной ткани и устранением характера ювенильности. В Португалии, Аргентине и Венгрии занимаются изучением общих вопросов оздоровления посадочного материала винограда и созданием базовых маточников. В Италии и США под руководством профессоров Woker

R. и Meridit К. в условиях in vitro исследуют проблемы, связанные с генетической инженерией и клеточной селекцией винограда.

Похожие диссертационные работы по специальности «Виноградарство», 06.01.08 шифр ВАК

  • Биологические особенности слаборослых клоновых подвоев яблони при клональном микроразмножении 2005 год, кандидат сельскохозяйственных наук Минаев, Вадим Александрович

  • Влияние регуляторов роста на рост, развитие, плодоношение и качество урожая винограда в условиях Ростовской области 2007 год, кандидат сельскохозяйственных наук Панова, Мария Борисовна

  • Клональное микроразмножение и депонирование перспективных форм груши 2012 год, кандидат сельскохозяйственных наук Ташматова, Лариса Владимировна

  • Особенности клонального микроразмножения in vitro и ускорение селекции новых ремонтантных форм малины 2004 год, кандидат сельскохозяйственных наук Сковородников, Дмитрий Николаевич

  • Система производства посадочного материала винограда высших категорий качества 2006 год, доктор сельскохозяйственных наук Кравченко, Леонид Васильевич

Заключение диссертации по теме «Виноградарство», Батукаев, Абдулмалик Абдулхамидович

1. В результате испытания гиббереллина на семенных сортах винограда было установлено, что действие препарата на виноградное растение зависит от биологических особенностей сорта, концентрации раствора препарата и срока обработки.

2. Сорта винограда группы с. опе^аИв в целом более перспективны для практического использования гиббереллина, чем сорта групп с. осЫ<1еп1аН8 Ие^. и с. ропйка Ке§т. Так, у сортов с. осаёеп1аН8 Рислинга и Муската венгерского при обработке их насаждений гиббереллином в конце цветения произошло значительное увеличение горошения ягод и уменьшение числа нормально развитых ягод. У сортов же с. опеп1аН8 Ме|»г. Сурхак китабский, Халили черный, Тайфи розовый, а также сортов с функционально женским типом цветка Каттакурган и Нимранг, напротив, увеличилось количество ягод в грозди.

3. При обработке насаждений винограда гиббереллином у обоеполых сортов с. опег^аНБ Ые^. Юмалак, Сурхак китабский, Халили черный, Джанджал кара, Тайфи розовый через 10 дней после цветения увеличивается масса грозди. У сортов, имеющих функционально женский тип цветка, Каттакурган и Нимранг увеличение массы грозди отмечается как через 10 дней после цветения, так и в конце цветения.

4. Для повышения урожайности для всех представителей трех эколого-географических групп сортов является срок обработки через 10 дней после цветения. Для сортов с. осаёейаИз Рислинг, Мускат венгерский - обработка гиббереллином в концентрации 50 мг/л, а для сортов с. опе^аИв - в обеих концентрациях 25 мг/л и 50 мг/л. У сортов с функционально женским типом цветка наибольшая прибавка урожая получена в варианте при обработке в конце цветения в концентрации 50 мг/л.

5. Влияние гиббереллина на содержание сахара в ягодах винограда зависит от биологических особенностей сорта, развития семян в ягоде. У семенных сортов в том случае, когда гиббереллин вызывает увеличение в грозди числа бессемянных ягод, он способствует повышению сахаристости, ускорению сроков созревания, что является важным фактором особенно для сортов раннего периода созревания.

6. Обработка семенных обоеполых сортов с. осЫёе^аИз методом сплошного опрыскивания кустов раствором гиббереллина в концентрации выше 25 мг/л, а для обоеполых семенных сортов с. опеп1аИз выше 50 мг/л нежелательна, так как это может вызвать усиление роста побегов и снижение плодоносности кустов.

7. Среди семенных сортов винограда наиболее отзывчивы на обработку гиббереллином сорта с функционально женским типом цветка. Под действием препарата увеличиваются размеры ягод и повышается их завязываемость, что приводит к увеличению массы грозди и урожая. Эффективны концентрации от 25 до 50 мг/л. Обработку можно производить с конца цветения и в течение 10 дней после него. Лучшие результаты дает однократная обработка в конце цветения раствором в концентрации 50 мг/л. В связи с тем, что препарат у этих сортов не вызывает избыточного роста побегов и снижения плодоносности кустов, обработку можно проводить методом сплошного опрыскивания.

8. Наиболее перспективным на сортах винограда западно-европейской группы сортов является использование гиббереллина в смеси с препаратом дропп в срок через 5 дней после цветения. Обработка смесью препаратов способствует увеличению размеров ягод, повышению их завязываемости в грозди и существенному увеличению массы гроздей. Качество винограда при этом сохраняется на высоком уровне.

Обработку сортов винограда с функционально женским типом цветка гиббереллином можно проводить механизированным способом. Для этой цели используют опрыскиватель ОУМ-4. Однако, можно использовать серийный опрыскиватель ОН-400-5 со специально установленными вертикальными штангами. При опрыскивании, для получения хорошего качества обработки, необходимо применять совмещенный принцип: штанговое опрыскивание с вентилятором (с целью обнажения соцветий под действием воздушного потока).

Для получения высоких прибавок урожая от применения гиббереллина следует перед механизированной обработкой тщательно провести выломку и подвязку зеленых побегов с целью качественного покрытия соцветий раствором препарата.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате испытания гиббереллина на семенных сортах винограда было установлено, что действие препарата на виноградное растение зависит от биологических особенностей сорта, концентрации раствора препарата и срока обработки. Для повышения урожайности для всех представителей трех экологснгеографических групп (с. осЫёе^аШ, с. ропШса, с. опе^аИв) является срок обработки через 10 дней после цветения. Для сортов с. осс1ёеп1аНз Рислинг, Мускат венгерский обработка гиббереллином в концентрации 50 "/л, а для сортов обоих концентрациях 25 ш/л и 50 ж/л.

Среди семенных сортов винограда наиболее отзывчивы на обработку гиббереллином сорта с функционально-женским типом цветка. Под действием препарата увеличиваются размеры ягод и повышается их завязываемость, что приводит к увеличению массы грозди и урожая. Эффективны концентрации от 25 ш/л до 50 ш!л. Обработку можно проводить с конца цветения и в течение 10 дней после него. Лучшие результаты дает однократная обработка в конце цветения раствором с концентрацией 50 ш!л Г связи с тем, что препарат у этих сортов не вызывает избыточного роста побегов и снижения плодоносности кустов, обработку можно проводить методом сплошного опрыскивания кустов.

Гиббереллин оказывал определенное влияние на фотосинтетическую деятельность растений, степень и направленность у всех включенных в опыт сортов был различным. У сортов с функционально-женским типом цветка Каттакурган увеличивалась чистая продуктивность фотосинтеза по мере повышения концентрации препарата. У обоеполого сорта винограда Хусайне изменения практически отсутствовали, а у другого обоеполого сорта Баян ширей отмечено снижение чистой продуктивности фотосинтеза при обработке гиббереллином.

Существенно не изменилось содержание хлорофилла в листьях винограда, обработанных гиббереллином. Лишь у сорта Баян ширей в варианте с концентрацией 50 мг/л содержание хлорофилла снижалось, но только в зоне побега с интенсивно растущими листьями.

Почти у всех изучаемых в опыте сортов винограда гиббереллин способствовал повышению сахаристости сока ягод. В основном повышение сахаронакопления наблюдалось при обработке препаратом в конце цветения.

На основании имеющихся в настоящее время данных и проведенных исследований можно констатировать, что нормальное развитие ягод у винограда стоит в неразрывной связи с развитием в них семян.

Гиббереллин практически на всех сортах винограда вызывает угнетение развития семян. Это выражается в уменьшении числа семян и снижении средней массы одного семени. Под действием препарата образуются бессемянные ягоды, количество ягод с одним семенем и с двумя семенами увеличивается. Так, на сорте винограда Каттакурган при обработке гиббереллином было получено 83,3 % бессемянных ягод, остальные 16,7% приходились на ягоды с одним и двумя семенами. По отношению к другим сортам следует выделить два сорта винограда Баян ширей и Тайфи розовый, у которых бессемянность ягод в процентном отношении соответственно образовалось 75 % и 83 %.

Сорта, имеющие более высокий (выше 45) показатель семенного индекса (отношение массы мякоти к массе семян) существенно отзываются на применение гиббереллина, чем сорта с низким семенным индексом.

Гиббереллин усиливает рост побегов семенных сортов винограда. Исключением являются сорта винограда с функционально женским типом цветка Каттакурган и Нимранг, на которые препарат повлиял несущественно на ростовые процессы. Последнее связано с тем, что у них значительно увеличилась урожайность, на что затрачивается большое количество продуктов ассимиляции.

Препарат практически на всех сортах улучшил вызревание лозы, которое имеет большое значение для плодоношения и размножения винограда. Однако, наиболее высокий процент вызревания побега отмечается у сортов винограда Рислинг и Ркацители.

При изучении роли гиббереллина в генеративном развитии виноградного растения мы установили, что препарат в зависимости от применяемых концентраций и сроков обработки может изменять морфогенез виноградного растения, направляя его по вегетативному пути. Микроскопические анализы свидетельствуют, что препарат изменяет форму и размер глазков. Подушечка глазка разрастается, наступает ее одревеснение. При концентрации гиббереллина 100 мг/л у сортов винограда Катгакурган, Баян ширей, Рислинг происходит выпад центральной почки. На сорте винограда Баян ширей, концентрация гиббереллина 50 мг/л, образует в глазках недоразвитые соцветия.

Фенологические наблюдения показывают, что применение препарата в конце цветения приводит к задержке распускания почек на 4-5 дней, а также гиббереллин вызвал снижение коэффициента плодоношения куста у сортов винограда Рислинг и Баян ширей при обработке в концентрации 50 мг/л в конце цветения. У остальных исследуемых сортов агробиологические показатели были на уровне контроля.

Глава 4. Влияние регуляторов роста на семенные сорта и перспективные селекционные формы винограда в условиях Молдавии

4.1. Влияние совместного применения Гиббереллина с препаратом Дроп на величину грозди и ее структуру

Как свидетельствуют литературные данные и результаты наших исследований, в целом сорта винограда, относящиеся к западно-европейской группе (с. осшёе^аНБ), отличаются за редким исключением индифферентной или негативной реакцией на обработку гиббереллином. В большинстве случаев препарат вызывает у них сильное изреживание гроздей, усиление горошения и снижение массы ягод. Отрицательный эффект усиливается по мере повышения концентрации раствора препарата. В целях установления возможности устранения негативного влияния гиббереллина на сорта западно-европейской группы нами был испытан способ совместного применения гиббереллина с препаратом дропп, обладающим цитокининовым действием. В качестве объекта исследований были отобраны новые перспективные селекционные формы селекции НПО "Виерул" Молдавской Республики. Исследования проводились в основной зоне промышленного возделывания сортов этой группы - Молдавской Республики, на экспериментальной базе НПО "Виерул".

Каждый вариант опыта включал в себя 10 модельных плодоносных побегов. Обработка растворами препаратов осуществлялась методом сплошного опрыскивания побегов с помощью ручного опрыскивателя. Схема опыта представлена в таблицах. В опыте проведены учеты массы грозди, величины и количества ягод в грозди, сахаристости сока ягод, количества и массы семян в ягодах каждой из учетных гроздей варианта по общепринятым в виноградарстве методикам.

Список литературы диссертационного исследования доктор сельскохозяйственных наук Батукаев, Абдулмалик Абдулхамидович, 1999 год

1. Абраменко Н. М., Стаканова Р. В., Чернец А. М. Микроразмножение плодовых - В кн.: Культура клеток растений и биотехнология: Тез. докл. IV Всесоюзной конф. Кишинев, 1983, с. 112.

2. Я. Абраменко Н. М., Леманова Н. В., Цурхан И. Г. Вирусные болезни земляники и методы получения безвирусного посадочного материала. - "Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии", 1973, вып. 4, с. 39-40.

3. Абраменко Н. М. Изучение возможности ускоренного размножения растений в культуре in Vitro // Вирусные микроплазменные и бактериальные болезни плодовых культур и винограда в Молдавии - Кишинев - 1980. - с. 100-105.

4. Ц. Алехно Г. Д. Клональное микроразмножение роз как перспективный способ получения высококачественного посадочного материала // Тез. докл. Респ. конф./Молодежь Удмуртии - ускорению научно-технического прогресса. - Устинов, - 1985, - с. 209-210.

5. Алехно Г. Д., Высоцкий В. А. Клональное микроразмножение роз.// Цветоводство. - 1986. - № 1 - с. 16-17.

6. Артамонов В. И. Биотехнология - агропромышленному комплексу. - М.: "Наука". - 1989. - 160 с.

7. Байраков В. В. Квопросу использования клиноптолитовых пород в растениеводстве // Научно-практическая конф. «Добыча,переработка и применение цеолитов»; Сб. Тез. докл. Тбилиси.- 1986.-е.106-108.

8. Бартин И.В., Меркулов С.М., Корховой В.И., Копань В.П. Микроклональное размножение груши in Vitro // Физиология и биохимия культурных растений. 1994. - Т.26. - N 1- с.84-90.

9. S. Байраков В.В К вопросу использования клиноптилолиловых пород в растениеводстве // Научн. Конф. "Природные цеолиты »: Сб. тез. докл. -София- 1986,- с. 106-108.

10. Биотехнология растений: культура клеток. Перевод с англ. Негрука В. И.

11. М.: "Агропромиздат". - 1989. - 280 с.

12. Бленда В. Ф., Кириленко Е. Д. Регенерация черной смородины из апикальных меристем. - Физиология и биохимия культурных растений. - 1982. - т. 14. - № 3. - с. 244-247.

13. Бленда В. Ф., Калинин Ф. Л., Кириленко Е. Д. Фитогормональная регуляция сред при регенерации черешни in Vitro. - В кн.: Культура клеток растений и биотехнология: Тез. докл. IV Всесоюзн. конф. Кишинев, 1983, с. 105.

14. Бленда В. Ф. Адаптация подвоев косточковых культур, полученных из изолированных меристем. // Садоводство и виноградарство. 1994. - N 3. -с.36-38.

15. Брек Д. Цеолитовые молекулярные сита. М., Мир - 1976. - 778с. 14. Бургутин А. Б. Микроклональное размножение винограда / В кн.: Биология культивирования клеток и биотехнология растений. - М. - "Наука".1991, - с. 216-220.

16. Бургутин А. Б., Бутенко Р. Г., Катаева Н. В., Голодрига П. Я. Быстрое клональное размножение виноградного растения // с.-х. биология. - 1983. - №7, -с. 48-50.

17. У. Бутенко Р. Г. Применение метода культуры изолированных верхушечных почек для изучения процесса роста и органогенеза растений // Физиология растений. - 1960. - Т. 7. - вып. 6. - с. 715-723.

18. Бутенко Р. Г. Культура изолированных тканей и органов и физиология морфогенеза растений. М., "Наука", 1964, с. 91-272.

19. Бутенко Р. Г. Использование культуры тканей и клеток растений сельскохозяйственной науке и практике. - В сб. Современные проблемы плодоводства. М., 1977, с. 99-108.

20. QH. Бутенко Р. Г. Использование культуры тканей растений в сельскохозяйственной науке и практике. - "С.-х. биология", 1979, Т. 14, вып. 3, с. 306-316.

21. Бутенко Р. Г. Клеточные культуры: новый взгляд, новые технологии // Будущее науки, - М. 1983. - вып. 16. - с. 136-146.

22. Qi. Бутенко Р. Г. Технология in Vitro в сельском хозяйстве // с.-х. биология. - 1983,- №5, - с. 3-7.

23. Бутенко Р. Г. Индукция морфогенеза в культуре тканей растений // Гормональная регуляция в онтогенезе растений. - М., 1984. - с. 42-54.

24. Велчев В., Миланов Е. Регенерация на каллусни культури от прашници и плодници при ягодата // Градинарска и лозарска наука. - 1984. - Год. XXI. - № 2. - с. 29-35.

25. ЪО. Вердеревская Т. Д., Абраменко Н. М. Получение и ускоренное размножение безвирусного посадочного материала плодовых и ягодных1. ЧТОкультур II Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1984. - № 6, -с. 26-28.

26. Вердеревская Д.Д., Маринеску В.Г. Вирусные заболевания винограда в Молдавской сср и и методы получения безвирусного посадочного материала винограда// Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1972.-№2,-с.38-42.

27. Вимзане Л. Ф., Земите М. Э. Влияние сорта на размножение сорта in Vitro. - В кн.: Культура клеток растении и биотехнология. Тез. докл. IV Всесоюзн. конф. - Кишинев, 1983, с. 128.

28. Винклер Б. Н., Лайнер Б. Оздоровление картофеля от вирусов методом культуры меристем. - "Картофель и овощи", 1970, вып. 8, с. 9-10.

29. Вилцане Л. Ф. Размножение in Vitro (фрезия) // Цветоводство. - 1985. - № 1, -с. 9.

30. Выращивание безвирусного посадочного материала семечковых культур./ Рекомендации Госагропрома Каз. ССР. 1989. - 169с.

31. Высоцкий В. А. Действие некоторых регуляторов роста на изолированные меристеметические верхушки черной смородины // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы // Сб. научн. тр./ НИЗИСНП. - М., 1976. - т. 9. - с. 101-107.

32. Высоцкий В. А., Попов Ю. Г., Трушечкин В. Г. Регенерационная способность меристематических верхушек древесных растений in Vitro // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы // Сб. науч. тр. / НИЗИСНП. - М„ 1976. - т. 9. - с. 89-100.

33. Высоцкий В. А. Регеиерациониая способность изолированных верхушек черной смородины и вишни и методы получения из них целых растений: Автореф. дис. канд. биол. наук. -Л., 1978. - 21 с.

34. Высоцкий В. А., Поликарпова Ф. Я., Трушечкин В. Г. Использование 6-бензиламинопурина для размножения плодовых и ягодных растений // Регуляторы роста и развития растений. - М. - 1981. - с. 155-156.

35. Высоцкий В. А., Алехно Г. Д. Клональное микроразмножение роз // Декоративное садоводство Нечерноземья // Сб. науч. тр. / НИЗИСНП. - М. - 1985, -с. 59-67.

36. Высоцкий В. А. Усовершенствование способов получения растений малины из изолированных меристематических верхушек // Ягодоводство в тематических верхушках // Ягодоводство в Нечерноземье / Сб. науч. тр./ НИЗИСНП. - М. - 1984. - с. 3-8.

37. ЧН. Высоцкий В. А., Герасимова Н. В. Клональное микроразмножение в системе производства оздоровленного посадочного материала малины // Ягодоводство в Нечерноземье: Сб. науч. тр. НИЗИСНП. - М., 1989-1990. - с. 65-75.

38. Высоцкий В. А., Упадышев М. Т. Регенерация вегетативных органов листовыми дисками и другими эксплантатами рода Rubus in Vitro // Физиология растений. - 1992. - т. 38. - № 3. - с. 584-591.

39. Выхристова Г. И. Культура ткани - перспективный метод размножения селекционного посадочного материала луковичных и цветочных растений // Пути интенсификации промышленного цветоводства. - Сочи, 1981. - с. 7983.

40. Выхристова Г. И. Использование культуры тканей и органов для размножения нарциссов, гиппеаструма и тюльпанов // Повышение экономической эффективности промышленного цветоводства. - Сочи, 1983.с. 18-19.

41. Глоба-Михайленко И. Д. Использование метода культуры ткани в цитрусоводстве // Субтропические культуры. - 1983. - № 5. - с. 105-111.

42. Голодрига П. Я., Зленко В. А., Бутенко Р. Г., Левенко Б. А. Ускоренное размножение ценных генотипов винограда. - "Садоводство", 1982, вып. 3, с. 24-27.

43. Голодрига П. Я., Зленко В. А., Арзуманов В. А. Роль in Vitro в интродукции растений // Плодоовощное хозяйство. - 1985. - № 7. - с. 51-52.

44. Голошкина Н. А. Изучение регенерационной способности сортов люцерны. - В кн.: Культура клеток растений и биотехнология. - Кишинев, 1983, - с.84.52, Григоровский Ю. Н. "Адаптация" // Энциклопедия виноградарства. - т. 1,-Кишинев, 1986, - с. 32.

45. Гутиева Н.М. Размножение in Vitro персика. / Биология клеток растений in Vitro, биотехнология и сохранение генофонда; Тезисы докладов VII международной конференции. 1977,- М,- с.415-416.

46. Даскалов Г.Ж. Влияние природных цеолитов на рост, развитие и урожай хлопчатника / Научн. Конф. «Природные цеолиты »: Сб. София, 1986. -с.373-378.

47. QI. Дмитриева Н. Н. Проблема регуляции морфогенеза и дифференциации в культуре клеток и тканей растений // Культура клеток растений. - М., 1980. - с. 113-123.

48. GM. Дорошенко Н.П. Особенности первого этапа микро-клонального размножения винограда // Повышение эффективности производства винограда и продуктов его переработки Новочеркаск.-1987.-с.106-114.

49. X Дорошенко Н.П. Микроклональное размножение перспективных сортов винограда // Тез. докл. Всесоюзн. научно-техн. конф. "Применение благотехнологий в животноводстве, растениводстве и вет. медицине".-М.,1988.-е. 163-164.

50. С (>. Дорошенко Н.П. Микроклональное размножение перспективных сортов Агат Донской и Алан-1 // Виноградорство РСФСР в условиях переориентации отрасли.- Новочеркаск.-1988,- с.54-59

51. Дорошенко Н.П., Кострикин И.А. Клональное микро-размножение столового винограда сорта Агат-Донской // Садоводство и виноградорстъо.1989.-№3.-с.37-40

52. Дорошенко Н.П., Кострикин И.А. Селекция бессемянных сортов винограда с использованием культуры семяпочек in Vitro. // Виноград и вино России.- ,1992.-№1.-с.14-18.

53. Дорошенко Н.П. Биотехнология в виноградорстве // Виноград и вино Росси. -1992.-№3.-с.40-42.

54. Дорошенко Н.П., Полещук А.Ф. Создание маточника перспективных сортов винограда в совхозе "Россия" // Виноград и вино России.-1992.-№2.-с.21-22.

55. К,. Дорошенко Н.П. Защита винограда от хронической инфекции при его продолжительном культировании "in Vitro". // Виноград и вино России.-1996.-№1.-с.6-8.

56. Дорошенко Н.П. Повышение Регенерационной способности меристем при получении безвирусного материала винограда // Виноград и вино России,-1997.-№2-с.6-9.

57. Дорошенко Н.П. Оптимизация клонального микроразмножения винограда./ Биология клеток растений in Vitro, биотехнология и сохранение генофонда; Тезисы докладов VII международной конференции. 1977,- М.-с.395-396.

58. Ермишин А. П. Изучение каллусной культуры in Vitro пшеницы и ржи с целью использования в селекционно-генетических исследованиях. - Автореф. дис. канд. биол. наук. - Минск, 1980.

59. Жаркова И. В., Гефранова Л. И. Влияние некоторых факторов на микроразмножение земляники // Интенсивные способы выращивания посадочного материала садовых культур. - 1984. - с. 133-138.

60. ЪЧ- Зайцев Г. Н. Методика биометрических расчетов. - М.: Наука, 1973. - 256 с.$f. Зауралов О. А. Генетическая природа адаптации // Межвуз. сб. науч. тр. - Саранск, 1983. - с. 23-28.

61. Захаренкова И. А., Сучкова Н. К. Массовое размножение in Vitro сортов земляники мировой коллекции // Междунар. конф. "Биология культивируемых клеток и биотехнология": Тез. докл. - Новосибирск, 1988. - ч. 2. - с. 315316.

62. Зленко В.А., Трошин Л.П., Котиков И.В. Размножение винограда методом in Vitro. Часть 2. Развитие растений in Vitro и их адаптация к условиям in Vivo // Виноград и вино России. 1998.-№ 5,- с.36-30.

63. S3. Иванова Н. В., Козицкий Ю. Н. Применение культуры изолированных тканей для размножения лилии // Бюлл. ГБС АН СССР. - М. - 1981. - вып. 121, -с. 87-92.

64. Иванова И. Физиологические основы микроклонального размножения растений. // Межд. Агропр. Журн. 1990ю - N 3. - с.35-40/1. ЛО А

65. Изворска Н. Влияние экзогенных ауксинов и цитокининов на морфогенез меристематической ткани различных растений. - Физиология растений. - София, 1980. - т. 6. - № 3. - с. 99-106.

66. Ильенко И. И., Редько В. И., Павловская Л. Л. Микроволновое размножение и перевод стерильной культуры сахарной свеклы в грунт // Селекция и семеноводство. - 1985. - № 59. - с. 27-29.

67. Калашникова Е.А. Методы совершенствования технологии клонального микроразмножения сосны обыкновенной. // Лесное хозяйство. 1994. - с.36-38.

69. Катаева Н. В., Бутенко Р. Г. Клональное микроразмножение растений. - М.: Наука, 1983. - 96 с.3?. Катаева Н. В. Культура тканей и органов фрезии // Физиология растений. - 1981, -вып. 28, -с. 1062-1064.

70. Катаева Н. В., Аветисов В. А. Клональное размножение растений в культуре ткани. - В кн.: Культура клеток растений. - М. - 1981. - с. 137148.

71. Клоконос Н. П., Соловьева Н. И. Размножение малины методом культуры тканей // Вестник с.-х. науки Казахстана. - 1986. - № 9. - с. 44-47.

72. Клоконос Н.П. Получение безвирусных клонов ягодных культур. // Садоводство и виноградарство. 1994. - N 4. - с.13-14.лог

73. Коев Г.В., Полинковский А.И. Применение нематицидов в борьбе с нематодами переносчиков вирусов в Молдавии. - В кн.: VIII Всесоюзное совещание по нематодными болезнями сельскохозяйственных культур. -Кишинев,- 1976.-е. 140-141.

74. Колесниченко В.М., Веретенников A.B. Культура тканей и клонирование гибридов ореха.//Изв. Вуз. Лесн. Журн. 1994. -N 4. - с.40-42.

75. Козарь Д.Г. Роль биотехнологии в повышении урожайности сельскохозяйственных культур.- Днепропетровск. 1987. - 32с.

76. Козицкий Ю. Н., Деревянкин П. В., Помазков Ю. И. Получение гвоздики из меристематических верхушек // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы // Сб. науч. тр. / НИЗИСНП. - М., 1976. - т.9. - с. 108-114.

77. Кондо И. Н., Ковалева Л. В. Влияние стимуляторов роста на корнеобразование у виноградных черенков // Изв. АН Уз. ССР. - 1952. - № 2. - с. 28-36.

78. Ht- Кочеткова Н. И., Алешкевич Л. В., Кочетов Ю. В. Особенности регенерации растений крыжовника в условиях in Vitro // Вестник с.-х. науки. - 1981,-№2, -с. 80-82.

79. Кравцов П. В., Кравцова Л. В. Культура изолированных зародышей и перспективы ее использования в селекции плодовых растений // Биофизические и физиолого-биохимические исследования плодовых и ягодных культур. - 1974, -с. 15-21.лп-т

80. Кузина Т. В. Стимуляторы и ингибиторы роста у черной смородины на протяжении вегетации при различной длине дня. // Физиология растений. - 1970, т. 7, вып. I, с. 76-82.

81. Кулаева О. Н. Цитокинины, их структура и функции. - М., "Наука", 1973 -264 с.

82. Г. Кривенцов В. И. Биохимические методы оценки адаптации растений к некоторым экстремальным факторам среды // Сб. науч. тр. / ГНСБ. - 1985. - т. 95, - с. 43-46.

83. Кушнир Г. П., Будак В. Е. Опыт клонального микроразмножения орхидей // Охрана и культивирование орхидей. - Киев, 1983. - с. 84-86.

84. НУ. Лавренева А. Н. Разработка клонального микроразмножения цимбидиума методом культуры ткани // Уровни организации процессов у растений. - Киев, 1981. - с. 97-101.

85. ПР. Лапчик В. Ф., Глеба Д. М., Струницкий В. А., Цап В. М. Использование

86. М^МсЭа. Ky/)k rnyfxn m к л не-¿i ciwcy^fPto ^ 9 ofeojc-eftw и^^р (и ^ ¿ч/то тч-енцр/ реЭк^уисчезающих лекарственных и дикорастущих видов растений // Охрана, изучение и обогащение растительного мира. - 1984. - вып. 11. - с. 113-118.

87. Лазаревский М. А. Изучение сортов винограда. - Ростов-на-Дону: Изд. Ростовск. Унив-та, 1963. - 152 с.

88. Литвак А. И., Кузьменко А. П., Гузун Н. И. Клональное размножение винограда: технология и перспектива широкого применения: Рукопись докл. на совещ. по биотехнологии. - М., 1987. - 6 с.

89. Литвак А. И. Состояние и координация биотехнологических и смежных с ними исследований в виноградарстве // Виноградарство и виноделие СССР. - 1989, -№2, -с. 76-82.

90. Лунева Л. С. Размножение ирисов методом культуры апикальных меристем in Vitro // Ботанический журнал. - 1977. - т. 62. - № 3. - с. 416421.

91. Максимов В. Н. Многофакторный эксперимент в биологии. - М.: Изд. МГУ, 1980. - 280 с.

92. Максимов В. Н. Планирование эксперимента в биологии и сельском хозяйстве. - М.: Изд. МГУ, 1991. - 302 с.

93. Милкус Б.Н. Xiphinema index переносчик вируса короткоузлия винограда // Защита растений.- 1977,- №5,- с.54-55.

94. Момот Т.С. Технология изолированных культур для микроразмножения лесных древесных растений. / Биология клеток растений in Vitro, биотехнология и сохранение генофонда; Тезисы докладов VII международной конференции. 1977,- М,- с.441-442.

95. Методика определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских работ, новой техники, изобретений и рационализаторских предложений // Рекомендации НТИ МСХ СССР. - 1979. - № 7. - с. 76.

96. Мещерякова Н. И., Бажанов В. Ф. Гормональная регуляция побегообразования в изолированной культуре апикальных меристем розы эфиромасленичной // Регуляторы роста и развития растений. - М., 1981. - с. 166-167.

97. Митрофанова О. В., Зленко И. Л., Воронова И. В., Соболева Л. Е. Технология получения безвирусного материала хризантем // Экспресс-информация / Серия: озеленение населенных мест. - 1984. - Вып. 8. - № 4. - 16 с.

98. Митрофанова О. В., Зленко И. Л., Соболева Л. Е., Феофилова Г. Ф. Получение безвирусного посадочного материала хризантем // Цветоводство. - 1985,-№4, -с. 11-12.

99. Некрасова Т. В. Культура изолированных почек плодовых растений // Физиология растений. - 1964. - т. II. - с. 127.

100. Нечипоренко В. И. Применение методов меристемы в цветоводстве // Инф. бюлл. - 1973. - с. 36-40.

101. Новикова В. М., Работягов В. Д. Получение растений в культуре изолированных почек амфигаплоида лаванды. - В кн.: культура клеток растений и биотехнология. - Тез. докл. .IV Всесоюзн. конф. - Кишинев, 1983.с. 145.

102. Насимов А. 3., Зленко В. А. Совершенствование способов адаптации растений винограда, размноженных методом in Vitro II Материалы научн. конф. молод, учен, и спец. Казахстана, посвящ. 70-летию Великой Окт. соц. рев. - Алма-Ата, 1987. - с. 39-40.

103. Попов Ю. Г., Трушечкин В. Г. Получение растений земляники методом культуры изолированных верхушек побега // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы / Сб. научн. тр. НИЗИСНП. - М., 1972. - с. 184-193.

104. Руте Т. Н., Мауриня X. А. Размножение растений огурца в культуре in Vitro. - В сб.: Культура клеток растений и биотехнология. Тез. докл. IV Всесоюзн. конф. - Кишинев, 1983. - с. 90.

105. Розенберг В. Р. Факторы, влияющие на регенерацию растений картофеля из меристемы. - В сб.: Культура клеток растений и биотехнология. - Кишинев: "Штинница", 1983. - с. 139.

106. Сафразбекян С. А., Урманцева В. В., Катаева Н. В. Роль сахарозы в регуляции морфогенеза каперса in Vitro // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. -М.: Наука, 1991. - с. 192-196.

107. Q02. Стаканова Р. В., Абраменко Н. М. Ускоренное размножение подвоев яблони в асептических условиях // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1984. - № 6. - с. 29-31.

108. НО. Трушечкин В. Г., Высоцкий В. А. Клональное микроразмножение подвоев и сортов вишни // Информационный листок. - 1985. - № 66. - 4 с.

109. Трушечкин В. Г., Высоцкий В. А., Алехно Г. Д. Клональное микроразмножение промышленных сортов розы // Информационный листок. - 1985. -№27-86, -4 с.

110. Турецкая Р. X. Физиология корнеобразования у черенков и стимуляторы роста. - М.: Изд. МГУ, 1961. - с. 9-12.

111. Турецкая Р. X., Поликарпова Ф. Я., Вегетативное размножение растений с применением регуляторов роста. - М.: Наука, 1968. - с. 16-24.

112. Турецкая Р. X., Кефели В. И., Саидова С. А. Действие природных и синтетических ингибиторов на разные формы роста // Физиология растений, 1969. - т. 16. - вып. 5. - с. 825-831.

113. Турецкая Р. X., Гуськова А. В. метаболизм и механизм действия фитогормонов. - В сб.: Труды Всесоюзн. конф. - Иркутск, 1979. - с. 21-27. 2 76. Уоринг Ф., Филлипс И. Рост растений и дифференцировка. - М.: Мир, 1984, -512 с.

114. Уайт Ф. Р. Культура растительных тканей. - М.: ИЛ, 1949. - 159 с. Ш. Федюнкин Д. В., Головнева Н. Б., Кошелева Л. Л., Бахнова К. В. Интенсивная культура растений в искусственных условиях. - Минск: Наука и техника, 1984. - 214 с.

115. ИЗ. Фадеева Т. С., Лутова Л. Н., Козырева О. Г., Брач Н. В. О роли фитогормонов в регуляции процессов регенерации генетически разных форм. - В кн.: Регуляторы роста и развития растений. Тез. докл. I Всесоюзн. конф. - М., 1981, -с. 178.та

116. Ю. Хасси Г. Размножение сельскохозяйственных культур in Vitro. - В кн.: Биотехнология сельскохозяйственных растений. - М.: Агропромиздат, 1987.с. 105-133.

117. Abdallah B.F., Fnayou A., Grenau S., Ghorbel A. Contribution â l"amélioration du microgreffage de la vigne // Bulleten de E"O.J.V. 1996. - № 785-786. - P. 601615.

118. Vf.Baumann G. Möglichkeiten und Grenzen der Virusfreimachung von Himbeeren durch Gewebekultur // Obstbau /Bonn/. 1981. -Jg. 6. - 1 3. - S. 88-89.

119. Blach R. recheches sur les cultures de meristemes et d"organes de Vigne in Vitro en vue de la sélection et de la conservation de genetipes // Bulletin de l"O.J.V. 1985. -№650-651.-P. 391-395.

120. W-Braser L.G., Harvey C.F. Somatic embryogenesis from anther-derived callus in two Actinidia species // Sei. Hort. (Neth). 1986. - v. 29. - 1 4. - P. 335-346.

121. SO. Broome O.C., Zimmerman R.H. In vitro propagation of blackberry // Hort. Sei. -1978.-v. 13. -№ 2. P. 151-153.

122. Buchala A.J. Pythoud F. Vitamin D and related compounds as plant growth substances I I Physiol. Plant. 1988. - № 2. - P. 391-396.

123. S. Buchala A.J., Schmid A. Vitamin D and its analogues as a new class of plant growth substances affecting rhisogenesis // Nature. 1979. - v. 280. - 1 571a. - P. 230231.

124. Cheema G.S. Sharma D.P. In vitro propagation of apple // Plant Cell Cult, in Crop Improvement: Plenum Press. 1983. - P. 309-307.2Si Chu C.C. in Proceedings of Symposium on Plant Tissua Culture- Science Press, Peking.-1978.-P.43.

125. Clark M.F., Adams A.N. Characteristics of the microplate method of imzumelinked immunosorbent assay for the detection of plant viruses // J. Gen. Virol. 1977. - v. 34.-№3.-P. 475-483.

126. Fallot J. La culture in Vitro des organes, tissus et cellules de Vigne. Interet et perspectives d"application pour la multiplication //1 Coll. Jnt. sur la Multiplication de la Vigne. 1982. - P. 32-37.

127. Fang G., Liang H. Изучение значения обработки холодом на эффективность культуры пыльников риса // Чжиу шэнли сюэбао, Acta Phytophysiol. Sin. 1985. v. 11.-M.-P. 366-380.

128. Girmen M., Zimmer K. In vitro-Kultur von Galantus elwesii. Regeneration bei verschiedenen pH-Werten, Kohlenhydraten und Umweltbedingungen // Gartenbauwissenschaft. 1988. - B. 53. - 1 2. - S. 51-54.

129. Gland A., Lichter R., Schweiger H.-G. Genetic and exogenous factors affecting embryogenesis in isolated microspore cultures of Brassica napus L. // J. Plant Physiol. 1988. - v. 132.- 1 5. - P. 613-617.

130. Golosin B., Radojevic L. Micropropagation of apple rootstocks // Acta Horticulturae. 1987. - v. 2. - 1 212. - P. 589-594.

131. Si".Grenan S. et Vlut C. Incidences de la thermotherapie in Vito sur les caractéristiques de production de quelques variétés de Vitis vinifera L. // Bulletin de l"O.J.V. -1992. № 709-710. -P.155-162.

132. Ж.Gu S., Gui Y., Xu T. Действие физических и химических факторов на частоту индукции растеньиц из пыльцы, изменения в образовании крахмала в пыльниках // Чжиу сюэбао, Acta Bot. Sin. 1984. - v. 26. -1 2. - P. 156-162.

133. Hamoui M. Culture in Vitro de la feverole (Vicia faba minor): bouturage, callogenese, organogenes // These, Montpelier. 1981.-318 p.

134. Harada H., Kyo H., Imamura J. Induction of embryogenesis and regulation of the developmental pathway in immature pollen of Nicotiana species // Curr. Top. Dev. Biol. 1986.-v. 20.-P. 397-417.

135. Harper P.C. Tissue culture propagation ot blackberry and tayberry // Hort. Res. -1978.-v. 18.-P. 141-143.

136. Hassani Z. Le microgreffage in Vitro. Une de ses application en viticulture: Etude de l"incompabilité entre quelques port-greffes et la variété Grenache (Vitis vinifera) // D.A.A., ENSAM. 1987. - 70 p.

137. Hassani Z. Influence del"acide beta-indole-butyrigue (A.I.B.) sur le comportement des microgreffes de Vigne cultivées in Vitro // Progresse Agricole, Viticulture. 1990. -№ 1990.-P.375-379.

138. Hauser В., Geiger E.-M., Horn W. Eignung von Gellan und verschiedenen1. ЛЛ 4

139. Agarqualitaten für Gewebekulturen von Kalanchoe Hybriden // Gartenbauwissenschaft. 1988. - B. 53. -1 4. -S. 166-169.

140. He D., Ouyang J. Изучение андрогенеза при культивировании пыльников пшеницы на стадиях мейоза, тетрады, ранней одноядерной и трехядерной пыльцы // Чжиу сюэбао, Acta bot. sin. 1995. - v. 27. - № 5. - P. 469-475.

141. Hedtrich C.M., Feucht W., Schimmelpfeng H. Pathogeneiiminierung und Vermehrung von Himbeeren durch Meristemspitzen-Kulturen // Erwerbsobstbau. -1980. B. 22. -№ 7. - S. 159-163.

142. Herler P.K., Palevitz B.A. Microtubules and microfilaments // Ann. Rev. Plant. Physiol. 1974. - v. 25. - P. 309. 5® A Huth H. Kultur von Himbeerpflanzen aus apikalen Meristem //

143. ЪоЬ. James D.J. The role of auxins and phloroglucinol in adventicious root formation in

144. M^.Ke S., Skirvin R.H., McPheeters K.D. Otterbacher A.G., Galletta G. In vitro germination and growth of Rubus Seeds and embryos // Hort. Sciense. 1985. - v. 20.-P. 1047-1049.

145. Keqin P., Duijng H. A kinetic study of potassium Alteraanthera philoxeroides // J. PlantNutr.-1987.-v. lO.-^.-P. 1983-1990. Iff- Kiss F., Zatyko J. Vegetative propagation of Rubus species in vitro // Bot. Kozlem. -1978.-v. 65.-P. 65-68.

146. Klaine S.J. Influence of thidiazuron on propagule formation in Hydrilla verticillata // J. Aquat. Plant Manag. 1986. -v. 24. - P. 80-82.

147. Kodandaramaiach J., Venkataramaiach C. Eau P.C. Rao K.N. Effect of B group vitamins on tlie endogenous cytokinin levels of cluster bean (Cyamopsis tetragonoloba) // Proc. Nat. Acad. Sci. (India). 1984. - v. 54. - № 2. - P. 95-98.

148. Leike H. Somaclonale Variation, Grenzen und Möglichkeiten direkten Nutzung in der Pflanzungzuchtung // Gartenbau. 1988. - Jg. 35. - № 6. - S. 167-169.

149. Martin С., Vernoy R., Carre M., Vesselle G., Collas A., Bougerey С. Vigne et ,techniques de culture in Vito. Quelques résultats d"une collaboration entre recherche publiqu et entreprise privée // Bulletin de l"O.J.V. 1987. - № 675-676. - P.447-458.

150. Martin C. et Collas A. De la culture in Vitro a la production de greffes-soudés issusdu greffage herbacé de la Vigne // Progrès Agricole et Viticole. 1992. - № 109(3).-P.61-68.

151. Martinez J. Sur les différents combinaisons de greffages des apex realises in Vitro entre Pecher, Abrocotier et Myrobolan // Centre Rech. Acad. Sci. 1979. - № 288. -P.759-762.

152. Vi Morel G. La culture des meristemes caulinaires // Bulletin Soc. fr. physiol. Veg. -1965.-V. 11, № 3. -P.64-67.

153. Ш Mullin R.H. et Schlegel D.E. Cold storage maintenance of strawberry meristem plantlets // Hortscience, 1976. - № 11. - P. 100-101.

154. JYj.Murashige T. Clonal crops through tissue culture // Springer-Verlag Berlin Heidelberg. -1977.

155. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobaco tissue cultures // Physiol., Plantarum. 1962. - v. 15. -1 3. - P. 473-497.

156. JV2. Nitsch J.P., Hitsch C. Hapioid plant from pollen grains // Science. 1969. - v. 163. - 3862.-P. 85-87.

157. W. Nozeran R., Bancilhon L. Les cultures in Vitro en tant que technique pour approche des problèmes poser l"amélioration des plantes // Ann. Amel. Plantes. 1972. - № 22(2). -P.167-185.

158. O. Nozeran R., Grenan S., Truel., Favre J. Morphogenese a partiz du stade juvenile de Vitis vinifera L. ussue de grane ou de culture in Vitro // Agronomi. 1983. - № 3(7). - P.681-684.

159. TJ. Pat. 225439 AI, DDR. Trager fur Nahrmedium in der pflanzlichen in vitro-Kultur /

160. Fehrsuhn G. Fritze G. 31.07.85. C 12 N 5/00. ■fr. Pat. 247232, DDR. Verfahren zur Erhaltung und Vermehrung von Pflanzen /

161. Rev. bras. bot. 1985. - v. 8. - № 2. - P. 143-147. jn.Predieri S., Malavasi F., Fasolo F. High-frequency shoot M26 (Malus pumila Mill.) //

162. HortScience. 1981. - v. 16. - P. 308-309. №. Ramaiach J.K., Reddy K.B., Kumar P.J. Uptake of major elements influenced by B-vitamins in green gram (Vigna radiata L.) // Proc. Nat. Acad. Sei. (India). - 1989. -v. 57.-№3.-P. 303-308.

163. Rosati P., Devreux M., Laneri U. Anther culture of strawberry // HortScience. -1975,-v. 10.-№2.-P. 119-120.

164. Shivanna K.R. In vitro fertilization and seat formation in Petunia violacea Lindi // Phytomorph. 1965. - v. 15. - P. 183-185.

165. J 72. Silva D.L.R., Cox P.C., Hetherington A.M. Mansfield T.A. The role of abscisic acid and calcium in determining the beha viour of adaxial and abaxial stomata // New Phytol. -1986. v. 104.-№ 1.-P. 41-51.

166. Silva D.L.R., Hetherington A.M., Mansfield T.A. Synergism between calcium ions and abscisic acid in preventing stomatal opening // New Phytol. 1985. - v. 100. -№4.-P. 473-482.

167. U. Snir J. Micropropagation of red raspberry I I Scientia Horticulturae. -1981.-v. 14. -№2.-P. 139-143.

168. Suvarnalatha G., Swamy P.M. Interaction of Ca and calmodulin antagonist CPZ on mitochondrial Ca ATP-ase activity of cowpea leaf discs during senescence // Curr. Sei. (India). 1988. - v. 57. - 1 9. - P. 497-499.

169. Svobodova I. Elimination of viruses by means of callus tissue culture // Proc. Intern. Conf. Plant Viruses. Wegeningen, 1966. P. 48-53.

170. Praxisanwendung // Rheinische Monatsschrift. 1983. - Jg. 71. - № 2. - S.52-54. in. Theiler R. Einsatz der Gewebekultur zur Anzucht pathogenfreier Pflanzen; Möglichkeiten und Probleme ihrer Anwendung // Erwerbsobstbau. - 1980. - Jg.22.-S. 226-231.

171. Я. Valat С., Grenan S., Auran G., Bonnet A. Guerison de quelques maladies a virus de la Vigne par thermotherapie de plantiles cultivées in Vitro // Vignes Vins. 1979. -№ 284. - P. 19-22.

172. Valat C., Grenan S., Auran G. Thermotherapis in Vitro: premieres observation sur les aptitudes de quelques variétés de porte-greffes et de Vitis vinifera traites // Vignes Vins. 1981. -№ 298. - P. 17-23.

173. Vf- Vàng S.Y., Ji Z.L., Sun T., Faust H. Effect of tihidiazuron on abscisic acid content in apple bud relative to dormancy // Physiol. Plant. 1987. - v.71. - 1 1. - P. 105109.

174. Vertesy J. Experiments on the production of virus free raspberry propagation material by meristem culture // Acta Hortic. 1979. - v. 95. - P. 77-81.

175. Welander M. In vitro culture of raspberry (R. idaeus) for mass propagation // J. Horticultures Science. 1987,- v. 60. - 1 4,- P. 493-499.

176. Welander M. In vitro culture of raspberry (Rubus idaeus) for mass propagation and virus elimination // Acta Horticulturae. 1987. - v. 2. - № 212. - P.610.

177. Hoi. Велчев Е., Стоянов С., Миланов Е. Размножаване на безбодилестата къпина in vitro. 2. Вкореняване на микроразмножени от сорт Торнфи // Градинарска и лозарска наука. 1983. - Т. 20. - № 7. - С. 16-23.

178. Welsh K.J., Sink. К.С. Morphogenetic responses of Browallia leaf sections and callus I I Ann. Bot. 1981. - v. 48. - № 5. -P. 583-590.

179. Чох White P.R. The cultivation of animal and plant cells. 2 nd ed. Ronald Press Co., New York.- 1963.4öS. Zatyko J.M., Simon I. In vitro culture of ovaries of Rubus species I I Acta Agronom. Acad. Scient Hung. 1975. - v. 24. - № 3/4. - P.277-281.

180. Чоь, Zenkteler M. Test-tube fertilization of ovules in Melandrium album Mill, with pollen grains of several species of the Caryophylaceae family // Experientia. 1967. - v. 23 .-№9.-P. 775.

181. Абдулаев И.К., Тагиев С.Б. Влияние гиббереллина на урожайность и содержание сахара в ягодах у сорта винограда Танквери в производственных условиях // Докл. АН АзССР. 1971. - Т.27, №2. - С. 82-85.

182. Абдулаев И.К.,Тагиев С.Б. Установление наилучших доз и сроков опрыскивания водным раствором соцветий сорта винограда Кишмиш розовый // Труды института генетики и селекции АН АзССР. 1974. - Т.7. - С.93-97.

183. Агафонов Н.В., Фаустов В.В. Способы повышения завязывания плодов у садовых растений. М.: 1975. - 52 с.

184. Абрамишвили Т.И. Влияние гиббериллина на изменение некоторых вторичных веществ в соцветиях виноградной лозы //Вестн. Груз, ботан. о-ва. -1972. №5. - С.28-38.

185. Болгарев П.Т., Мананков М.К. Влияние гиббереллиновой кислоты на отдельные органы виноградного растения // Гйббереллины и их действие на растения. - М.: Изд - во АН СССР, 1963. - С.245 - 252.

186. Бродниковский М.Н., Сханов З.С. Влияние гиббереллина на урожай винограда в условиях богары // Сельское хоз - во Таджикистана. - 1970. - №11. -С.53 -55.

187. Вангай Е.В. Гиббереллин и урожай винограда // Труды Чикментской обл. с. - х.опытн.станции. - 1969. - Т.З - С.86 - 88.

188. Вербина A.A. Изучение влияния различных стимуляторов роста на завязывание и развитие ягод винограда // Резервы повышения урожая с. - х. культур. - Одесса. - 1968. - С.207 - 210.

189. Галиченко Н.Б. Химические регуляторы ускоряют созревание плодов и ягод. - М.: Садоводство. 1975. - №4. - С.60 - 61.

190. Гамбург К.З. Кинетический анализ взаимодействия гиббереллина и ауксина // Гиббереллины и их действие на растения. - М.: Изд - во АН СССР. 1963, -С.194 -204.

191. Гамбург К.З. Взаимосвязь действия гиббереллина с ауксином // Регуляторы роста и рост растений. - М.: Наука. 1964. - С.77 - 100.

192. Гамбург К.З. Физиология действия гиббереллина на вегетативный рост растений // Регуляторы роста и рост растений. М.: Наука, 1964. - С.

193. Гамбург К.З. О возможных связях действия гиббереллина с обменом нуклеиновых кислот // Регуляторы роста растений и нуклеиновый обмен. - М.: Наука. - 1965. - С.48 - 56.

194. Гамбург К.З. Фитогормоны и клетки. - М.: Наука. - 1979. - С. 103.

195. Гвамичава Н.Э., Чичиашвили И.В. Динамика активности эндогенных регуляторов роста в однолетних побегах винограда сорта Горули мцване // Сообщ. АН ГрузССР. - 1982. - Т.108. №1. - С.153 - 156.

196. Гукасов А.Н., Малышева Т.Ф. Влияние гиббереллина на продуктивность некоторых сортов винограда // Труды института (Кубанский с.х. ин - т). - 1969. - вып. 21. - С.64 - 70.

197. Гукова М.М., Фаустов В.В. О взаимосвязи действия на растения гиббереллина и гетероауксина // Гиббереллины и их действия на растения. - М. - Изд - во АН СССР. - 1963. - С. 139 - 142.

198. Голинка П.И. Гиббереллины в пасоке винограда // Физиология и биохимия культурных растений. - 1973. - Т.5,вып.З. - С.321 -324.

199. Дзагнидзе Ш.Ш., Чанишвили Ш.Ш. Онтогенетическое изменение эндогенных фитогормонов в органах побега виноградной лозы // Сообщ. АН ГрузССР. - 1985. - Т.119, №3. - С.601 - 604.

200. Дзагнидзе Ш.Ш. Фитогормоны и ингибиторы роста в связи донорноакцепторными отношениями в виноградной лозе: Автореф. дисс. на соискание учен степени канд.биолог.наук. - Москва. - 1986. - 24с.

201. Джамалитдинов X., Дунаев В. С. Результаты применения ниббереллина на виноградной лозе в условиях Ура - Тюбинского района // Тематич. сб. научн. трудов НИИ садоводства и виноградорства им. Мичурина.

202. Душанбе. - 1972. - С.61 - 65.

203. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. - М.: Агропромиздат. - 1985, -С.351.

204. Ермолаева Е.Я., Козлова H.A., Бельденкова А.Ф. Действие гиббереллиновой кислоты на формирование хлоропластов и фотосинтез // Гиббереллины и их действие на растения. - М. - Изд - во АН СССР. - 1963. -С.143 - 155.

205. Живухина Г.М., Балыкова М.А. Влияние гиббереллина на активность фитогормонов и темпы роста растений // Рост растений и пути его регулирования. - М.: 1978. - С.10 - 19.

206. Захрабян Н.Р. Динамика эндогенных регуляторов роста в побегах новых сортов винограда в различные периоды покоя // Биолг. журн. Армении.1985. - Т.38, №6. - С.493 - 498.

207. Иванова В.А. К вопросу о действии и последствии гиббереллина на виноград // Научн. Зап. Воронежского отд. Всес. ботан. о -ва. - 1968. - С.4955.

208. Каланов Б.Ш. Влияние гиббереллина на анатомическую структуру гребня грозди // Узбек, биол. журнал. - 1963. - №4. - С.31 - 34.

209. Каланов Б.Ш. Динамика формирования проводящей системы гребня, соцветия и грозди // Виноделие и виноградорство СССР. - 1965. - №2. - С.37 -39.

210. Каланов Б.Ш., Молчанов B.JI. Разнокачественность цветков и соцветий как причина массового осыпания цветков и завязей у винограда // Труды НИИ СВ И В им. акад. P.P. Шредера. - Т.ХХХ1П. - Ташкент. - 1971.51.

211. Калинин Ф.Л. Билогическиа ктивные вещества в растеневодстве. - Киев. - "Наукова думка". - 1984. - С.315.

212. Карабанов И.А. К вопросу о действии гиббереллина на содержание хлорофилла в растениях //Физиология растений. - 1968. - Т. 15. - вып.6. - С.1068 - 1070.

213. Карабанов И.А. О завязывании черной смородины под действием гиббереллина // Ботаника (исследования). - Вып.И. - 1969. - С.64 - 72.

214. Карабанов И.А. Витамины и фитогормоны в жизни растений. - Минск: Урожай. - 1977. - С. 110.

215. Коваль Н.М., Страхов В.Г., Седлецкий В.А., Хреновсков Э.И. Эндогенные стимуляторы роста винограда // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1983. - №9. - С.53-54.

216. Кочерженко И.Е., Мойко Т.К. О роли естественных гиббереллинов в фотопериодической реакции персика и винограда // Докл. АН СССР. - 1967.

217. Т. 177. -№3. - С.720 - 723.

218. Катарьян Т.Г., Дробоглав М.А. Влияние гиббереллиновой кислоты на виноград // Виноградарство и садоводство Крыма. - 1960. - С.8 -10.

219. Катарьян Т.Г., Дробоглав М.А, Давыдова М.В. Влияние гиббереллтна на разные сорта винограда // Физиология растений. - 1960. - Т.7. - Вып.З.1. С.345 -348.

220. Катарьян Т.Г., Дробоглав М.А., Давыдова М.В. Гиббереллин и плодоношение винограда // Труды(Всес. научн. - исслед. ин - та виноделия и виноградорства "Магарач"). - 1963. - Т.12. - С.100 - 127.

221. Катарьян Т.Г., Чайлахян М.Х, Дробоглав М.А. и др. Влияние гиббереллина на плодоношение разных сортов винограда // Гиббереллины и их действие на растения. - М.: АН СССР. - 1963. - С.217 - 225.

222. Коверга A.C. К вопросу о использовании гиббереллиновой кислоты для повышения урожая плодовых культур и винограда // Тр. Никитского бот. сада. - 1970. - Т.46. - С. 95 - 107.

223. ЛиловД., Николова Е., Ауксины. Образование цветов и ягод винограда // Физиология растений. - 1976. - Т.23. - Вып.2. - С.380 - 384.

224. Лилов Д., Христов X. Содержание свободных и связанных гиббереллиновых веществ в цветках и плодах винограда с различнымицветообразованием и плодообразованием //Физиология растений. - София: 1978. - Т.4. - В. 1. - С.61 - 67.

225. Лудникова Л.А. Определение ростовых веществ в завязях семенного и партенокарпического сортов винограда // Применение физиологоактивных веществ в садоводстве. - М.: ВАСХНИЛ - 1974. - С. 187 - 191.

226. Максимов Г.Б., Полевей В.В., Радкевич Г.Н., Логвенкова Л.П. Гиббереллиноподобные вещества в тканях высших растений // Регуляторы роста и рост растений. - М.: Наука. - 1964. - С.53 - 76.

227. Мананков М.К. Стимуляция плодоношения у винограда // Виноградарство и садоводство Крыма. - 1969. - №2. - С. 10 - 14.

228. Мананков М.К. Установление оптимальных концентраций, сроков и способов обработки винограда гиббереллиновой кислотой //Гиббереллины и их действие на растения. - М.: АН СССР. - С.226 - 234.

229. Мананков М.К. К вопросу о применении гиббереллина на разных сортах винограда // Физиология растений. - 1970. - Т.17. - Вып.4. - С.726730.

230. Мананков М.К., Доровлева Л.М. Влияние гиббереллина на пигментный комплекс листьев винограда // Применени физиологическиактивных веществ в садоводстве. - М.: ВАСХНИЛ. - С. 128136.

231. Мананков М.К. Влияние гиббереллина на некоторые физиологические процессы винограда // Физиология и биохимия культурных растений. - 1975.

232. Т.7. - Вып.З. - С.301 - 305.

233. Мананков М. К. Некоторые вопросы теории и практики применения гиббереллина в виноградарстве // Применение физиолого активных веществ в садоводстве. - М.: ВАСХНИЛ. - С. 128-136.

234. Мананков М. К. Влияние гиббереллина на морфогенез соцветия винограда // Научн. докл. высш. школы Биол. науки. - 1975. - № 8. - С. 7378.

235. Мананков М. К. Роль гиббереллина // Садоводство. - 1976. - № 9.1. С. 31-32.

236. Мананков М. К., Смирнов К. В. Применение гиббереллина в виноградарстве // Итоги науки и техники (Растениеводство). - 1979. - С. 5095.

237. Мананков М. К. Физиология действия гиббереллина на рост и генеративное развитие винограда. Автореферат дисс. на соискание учен, степени докт. биол. наук: . Киев. - 1981. - 32 с.

238. Махмуд X. М. Изучение влияния гиббереллина на эндогенные регуляторы роста и качество плодов винограда. Автореф. дисс. на соискание учен, степени канд. биол. наук: . Ташкент, 1977. - 24 с.

239. Мелкоян Л. С., Саркисова М. М, Изменение содержания эндогенных регуляторов роста в побегах винограда // Виноделие и виноградарство СССР.1974. - № 5. - С. 59-61.

240. Мехти-Заде Р. М. Влияние гиббереллина на рост и развитие гроздей и ягод и на некоторые физиологические процессы у бессемянных сортов // Гиббереллины и их действие на растения. - М.: АН СССР. - С. 241-244.

241. Мержаниан А. С. Виноградарство // М.: Колос. - 1967. - 464 с.

242. Митрофанов Б. А., Оганенко А. С. Влияние физиологически активных веществ на интенсивность фотосинтеза // Гиббереллины и их действие на растения. М.: АН СССР. - 1962. - С. 156-160.

243. Муромцев Г. С., Агнистикова В. Н. Гормоны растений гиббереллиныы. - М.: Наука, 1973. - 270 с.

244. Муромцев Г. С., Корнева В. М., Герасимова Н. М. Гиббереллины и рост растений // Рост растений и природные регуляторы. - М.: Наука. - 1977.1. С. 193-213.

245. Муромцев Г. С., Агнистиковаа В. Н. Гиббереллины. - М.: Наука. - 1984, -208 с.

246. Негруль А. М. Виноградарство и виноделие. - М.: Колос. - 1968. -512 с.

247. Негруль А. М, Гордеева Л. Н., Калмыкова Т. И. Ампелография с основами виноградарства. -М.: Высшая школа. - 1979. - 400 с.

248. Найденов Л. Н. К вопросу физиологии окольцованного виноградного побега // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1973. - № 8.1. С. 18-20.

249. Носульчак В. А. Об изменчивости строения завязи винограда // Ботанический журнал. - 1969. - Т. 54. - № 3. - С. 460-463.

250. Носульчак В. А. Ранние и кишмишно-изюмные сорта винограда в условиях юго-западной Туркмении: Автореф. дисс. на соискание ученой степени канд. с.-х. наук: 06.01.08 - Л.: ВИР, 1969. - 33 с.

251. Никел Л. Дж. Регуляторы роста растений. - М.: Колос, 1984. - 190 с.

252. Перепелицина Е. П. Влияние некоторых ростовых веществ на урожай и качество бессемянных сортов винограда. Дисс. на соиск. уч. степени канд. биол. наук: 06.01.04. - Самарканд, 1967. - 175 с.

253. Плакида Е. К., Габович В. Н. Применение гиббереллина в виноградарстве. - Киев. - Урожай. - 1964. - 102 с.

254. Плотникова Н. В. О роли природных регуляторов роста в опадении органов у растений // Фитогормоны в процессах роста и развития растений. - М.: 1974, -С. 74-87.

255. Портянко В. Ф., Дулова М. К. Влияние йода, хлора, бора, гиббереллина и других стимуляторов на прорастание пыльцы и рост пыльцевыхтруббок винограда // Виноделие и виноградарство СССР. - 1969. - № 5. - С. 27-28.

256. Практикум по физиологии растений. - М.: Колос. - 1972. - 168 с.

258. Регуляторы роста и развития растений (Тезисы докладов I Всес. конференции). - М.: Наука. - 1981. - 302 с.

259. Радионова Н. А., Рункова Л. В. Действие гиббереллиновой кислоты на содержание естественных ауксинов и на некоторые физиологические процессы в растениях // Гиббереллины и их действие на растения. - М.: АН СССР. - 1963, -С. 134-138.

260. Ромашко И. С., Семенов А. К. Морфологическая и физиологическая характеристика различных типов цветков в соцветиях и особенности формирования ягод в гроздях винограда // Виноделие и виноградарство. - 1972, -№ 12, -С. 24-31.

261. Рубин Б. А. Курс физиологии растений. - М.: Высшая школа. - 1976. -576 с.

262. Савваф X. Влияние некоторых ростовых веществ на рост, развитие и плодоношение виноградарства. Автореф. дисс. на соиск. ученой степени канд. с.-х. наук: -М. - 1965. - 19 с.

263. Саркисова М. М. Влияние гиббереллина и ретарданта на дыхание у различных сортов винограда // Доклады АН арм. ССР. - 1986. - Т. 46. - № 3.1. С. 127-131.

264. Саркисова М. М. Значение регуляторов роста в процессах вегетативного размножения, роста и плодоношения виноградной лозы и плодовых пород. Автореф. дисс. на соиск. ученой степ. докт. биол. наук: - Ереван. - 1973, -45 с.

265. Саркисова М. М., Арутюнян Э. А., Оганесян Р. С. Влияние синтетических ростовых препаратов на активность дыхания и окислительно-восстановительные ферменты в побегах виноградной лозы в период глубокого покоя // МСХ Арм. СССР. - 1976. - № 3. - С. 62-68.

266. Саркисова М. М. Значение регуляторов роста в процессах роста и развития виноградной лозы и плодовых культур // Труды Арм. НИИ виноградарства, виноделия и плодоводства.,- 1977. - Т. 14. - С. 254. - 278.

267. Смирнов К. В., Перепелицина Е. П. Действие и последействие гиббереллина на виноградное растение // Химия в сельском хозяйстве. - 1970.12, -С. 53-55.

268. Смирнов К. В., Фузайлов К. Роль ростовых веществ в развитии ягод и семян винограда // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1974,-№12, -С. 25-28.

269. Смирнов К. В., Перепелицина Е. П. Испытание физиолого активных веществ на винограде // Труды НИИ садоводства, виноградарства и виноделия им. Шредера. - 1976. - Вып. - 37. - С. 21-30.

270. Снегов Б. Новый стимулятор // Сельская жизнь. - 1969. - № 2. - С.23.24.

271. Стоев К. Д. Основные закономерности созревания и нарастания объема ягод // Вып. Физиология сельскохозяйственных растений. - М.: 1970.1. Т. 3, -С. 139-180.

272. Солдатова Р. Ю., Эпштейн В. Б. Фотосинтез и проводящая система у разнопродуктивных сортов винограда // Труды Самарк. Гос. ун-та. - 1978. - Вып. 372, -С. 58-63.

273. Тагиев С. Б. Влияние ростовых веществ на рост, развитие, урожайность и технологические особенности развития сортов винограда Азейбаржжана. Автореф. дисс. на соиск. ученой степени канд. с.-х. наук: - Баку, 1967. - 23 с.

274. Ташкенбаев А. X. Гиббереллин на винограде бессемянных сортов // Садоводство. - 1977. - № 6. - С. 34.

275. Ткаченко Г. В. Влияние гиббереллина на рост и плодоношение виноградной лозы // Гиббереллины и их действие на растения. - М.: АН СССР. - 1963. - С. 235-240.

276. Туркова Н. С., Строганова М. А. О действии гиббереллина на обмен веществ растений длинного дня // Регуляторы роста растений и нукклеиновый обмен. - М.: Науука. - 1965. - С. 57-64.

277. Хамди М. М., Имамалиев А. И., Нуритдинова Ф. Р. Влияние гиббереллиновой кислоты на эндогенные гиббереллиноподобные вещества ягод винограда // Узб. биол. журн. - 1977. - № 3. - С. 71-76.

278. Хрянин В. Н. Влияние гиббереллина на содержание алколоидов и хлорофилла в лекарственных растениях // Научн. докл. высш. школы биол. науки. - 1973. - № 1. - С. 78-80.

279. Хрянин В. П., Хрянина Т. М. Действиее хлорхолинхлорида и гиббереллина на рост и развитие растений // Рост растений и пути его регулирования. - М.: 1976.- С. 111-119.

280. Чайлахян М. X., ЛожниковаВ. П. Гиббереллиноподобные вещества в высших растениях и их влияние на рост и цветение // Физиология растений. - 1960. - Т. 7. - Вып. 5. - С. 521-530.

281. Чайлахян М. X., Саркисова М. М., Коганков В. Г. Влияние гиббереллина на плодоношение виноградной лозы в условиях Армении // Известия АН Арм. ССР. Биол. науки. - 1961. - Т. 14. - № 2. - С. 39-54.

282. Чайлахян М. X., Саркисова М. М. Влияние гиббереллина на рост ягод виноградной лозы // Докл. АН СССР. - 1963. - № 1. - С. 219-222.

283. Чайлахян М. X., Саркисова М. М. Динамика природных гиббереллинов у бессемянных и семенных сортов винограда в связи с влиянием гиббереллиновой кислоты // Докл. АН СССР. - Т. 165. - № 6. - 1965. - С. 1443-1446.

284. Чайлахян М. X., Саркисова М. М. Последействие гиббереллина на плодоношение виноградной лозы // Известия АН Арм. СССР Биол. науки. - 1965. -Т. 18, -№2, -С. 3-10.

285. Чайлахян М. X. Азарян X. Г. Влияние гиббереллина на рост растений длиннодневных видов в связи с фотопериодической индукцией // Докл. АН Арм. ССР. - 1969. - Т. 49. - № 2. - С. 102-107.

286. Чайлахян М. X., Хлопенкова Л. П. Передвижение гиббереллинов и гормональных веществ, влияющих на образование цветков в целых растениях // Физиололгия растений. - 1972. - Т. 19. - Вып. 5. - С. 1002-1010.

287. Чайлахян М. X., Хлопенкова Л. П., Хажакян X. К. О передвижении гиббереллинов и влияние их на рост побегов и утолщения стебля в целых растениях // Докл. АН СССР. Серия Биология. - 1974. - Т. 215. - № 2. - С. 484-487.

288. Чайлахян М. X. Гормональные регуляторы цветения растений // Физиол. раст. - 1976. - Т. 23. - Вып. 6. - С. 1160-1173.

289. Эманкулов У., Савченко А., Бродниковский М. Гиббереллин и урожай винограда // Сельск. хоз-во Таджикистана. - 1979. - № 11. - С. 5356.

290. Юзбашева А. К. Применение гиббереллина в виноградарстве // Сельск. хоз-во Таджикистана. - 1968. - № 7. - С. 38-40.

291. Якушкина Н. И., Чугунова Н. Г. Физиологическое действие света и вопрос о регулировании роста растений с помощью гиббереллина // Регуляторы роста и их действие на растения. - М.: 1967. - С. 111-123.

292. Якушкина Н. И., Чурикова В. В. Влияние внешних условий на образованиие ауксинов и гиббереллинов в растениях // Регуляторы роста и их действие на растения. - М.: 1967. - С. 137-147.

293. Якушкина Н. И., Пушкина Г. П. Физиологические особенности хлоропластов растений, обработанных гиббереллином и кинетином // Научн. доклады Высшей школы. Биол. науки. - 1972. - № 1. - С. 75-79.

294. Якушкина Н. И., Пушкина Г. П. Влияние гиббереллина и кинетина на содержание фитогормонов и их распределение в клетке // Рост растений и пути его регулирования. - М.: 1976. - С. 11-12.

295. Янин Г. И., Калинченко А. Н. Применение гиббереллина на винограде // Виноделие и виноградарство СССР. - 1983. - № 3. - С. 24-25.

296. Alleweldt G. Die wircung der ugubberellinsäure auf einjäriye Reben bei verschiedener Photoperiode. // Vitis. - 1959. - Bd. 2, H. 1. - S. 22-23.

297. Alleweldt G. Förderung des Jnfloreszenzwachstums der Reben durch ugibberellinsäure. // - 1959. - Bd. 2. - S. 71-78.

298. Alleweldt G. Die Beziehimgen zwichsen photoperiodischer Reaktion und ugibberellinsäure - Empfindlichkeit bei Reben. // Z. Pflanzenzucht. - 1960. - Bd. 43, H. I, - S. 63-84.

299. Alleweldt G. Weitere Unterchungen über die sortenspezifische ugibberellinreaktion der Reben. // Z. Pflanzenzucht. 1961. - Bd. 45, H. 2,- S. 178193.

300. Alleweldt G. Unterchungen über die Blutenbildung der Reben. // Vitis.-1964.-Bd. 4, H.2.- S. 176-183.

301. Alleweldt G. Jeter E. Unterchungen über die Beziehungen zwischen Blutenbidung und Triebwachstum bei Reben. // Vitis. 1969. - Bd. 8, H.4. - S. 286313.

302. Anticliff A.J. Field Trial with ugrowth Regulators on the Zante Currant (Vitis vinifera). // Vitis. 1967. -Bd. 6, H.l. - S. 14-20.

303. Agarvala S.C., Sharma C.P. Effect of auxin and gibberellic acid on some aspects of growth and metabolism of boron reficient sugar beet. // Ind. J. Plant Physiol. 1978. Vol. 21, 3. - P. 292-295.

304. Asakava Y., Tamari K., Jnoue K., Kaji J. Translocation and intercellular distribution of tritiated gibberellin. //Agr. Biol. Chem. 1974. - vol. 38, 4. - P. 713717.

305. Bertrand D.E., Weaver R.J. Effect of exogenous gibberellin on endogenous hormone content and development for "Black Corinth" grapes. // Vitis. 1972. - H.10. S. 292-297.

306. Bearder J.R., Sponsel V.M. Selected topics in gibberellin metabolism. // Biochem. Soc. Trans. 1977. - vol. 5. - P. 569-582.

307. Bernal Zugo J., Beachy R.N., Verner J.E. The response of barley aleurone layers to gibberellin acid includes the transcription of new seguences. // Biochem and Biophys. Res Communs. - 1981. - vol. 102, 2. - P. 617-623.

308. Bhalla P.R., Patel R.M. Effect of gibberellic acid on Thompson seedles grapes. // Phiysiol. Plant. 1971. - Vol. 24. - 1. - P. 106-109.

309. Bhalla P.Z. Gibberellin-like substances in developping Woterrmelon. // Phisiol. Plant. 1971,- vol. 24. - 1. - P. 106-109.

310. Brian R.W. Role of gibberellin like hormones in regulation of plant growth and flowering. // Nature. - 1958. - S. 1122 - 1123.

311. Brian R.W. An analysis of the effects of gibberellic asid on tomato leaf growth.// G. Exp. Bot. 1974. - V01. 25, 87. - P. 764-771.

312. Brown E., Moore I. N. Gibberellin and dirdling on seedless grapes.// Arkansas Farm Res. 1970. - Vol. 19, 2. - P.7.

313. Christodonlon A. , Weaver R.I. , Pool R.M. Response of Thompson seedless grapes to Prebloom Thinning. // Vitis. 1967. - Bd. 6, H. 3. - S. 303-308.

314. Clore W.I. Responses of Delaware grapes to gibberellin. // Proc. Amer. Soc. Hortic. Sci. Vol 87. - P. 259-263.

315. Considine J.A. , Coombe B. The Interaction of gibberellic acid and 2-chloroctyl trimethyl ammonium chlorid on fruit claster development in Vitis vinifera. // Vitis. 1972. Bd. 11,H. l.-S. 108-123.

316. Coombe G.B. Relationship of growth and development to changes in sugars, auxins and gibberellins in fruit in seeded and sedless varieties of Vitis Vinifera. // Plant Physiol. I960.- Vol. 35. - S. 241-250.

317. Coombe G.B. The effect of growth substances and liaf number on fruit set and size of Corinth and Sultana grapes. // J. Hort. Sci.- Vol. 40. P.307-316.

318. Coombe G.B. Hale C.R. The hormon content of ripeng grape berries and the effects of growth substants. // Plant Phisiol. 1973. - Vol. 51. - S. 629-634.

319. Dass H.C. , Randhava G.S. Differential respons of some seeded grape cultivar of Vitis Vinifera to application. // Vitis. 1967. - Bd. 6, H. 4. - S. 385-389.

320. Dass H.C., Randhava G.S. Effect of gibberellin on seeded Vitis Vinifera with special reference to indaction of seedlessness.// Vitis. 1968. - H.7. - S. 10-21.

321. Dass H.C. , Randhava G.S.Respons of Pusa Seedless grapes to 4-CPA, Kinetin and gebberellin acid. // Phisiol. Plant. 1968. - vol. 21. -P. 298-301.

322. Dass H.C. , Randhava G.S.Respons of certain seeded Vitis Vinifera verietes to gibberellin application at postbloom stade.// Am. Y. Enol. Viticult. 1968 -Vol.19.-P. 56-62.

323. Dass H.C., Randhava G.S. Effect of gibberellin on seeded Vitis Vinifera with special reference to indaction of seedlessness.// Vitis. 1968. - Bd. 7, H. l.-S. 10-21.

324. El-Zeftawi B.M.,West H.L. Effects of some growth regulators on the fresh and dry yeld of Zante currant (Vitis ViniferaVar.). // Vitis. 1970. - Bd. 9. H.l. - S. 47-51.

325. Farmahan H.L., Pandey R.M. Hormonal regulation of the lag phase in seeded and sedless grapes (Vitis Vinifera L.). // Vitis. 1976. - Bd. 15, H. 4. - S. 227-235.

326. Handel L.G. Effect of gebberellic acid on seeded wine grapes. // Wines and Vines. 1965. - Vol.46, N. 4. - P.62.

327. Janes Rassell Z., Philliphs J.D. Organs of gibberellin synthesis in lightgrown sunflower plants. // Plant Physiol. 1966. - Vol. 41, N.8. - P. 1381-1386.

328. Isoda R., ABA, JAA und GA levels in dormant buds of grape vines // Bull. Hiroshima Agric. Coll. 1975. - Vol.5. - P.125-131.

329. Inaba A., Ischiodo M., Sobijima R. Changes in endogenous hormon concentrations during berry development in relation to the ripening of Delavare grapes. // J.Japan. Soc. Hort. Sci. 1976. - Vol.45. - P. 245-252.

330. Ito H., Motomura Y., Konno Y., Hatyama T. Egsogenous gibberellin as responsible for the seedless on the development of seedless Delaware grapes. // Tohoku J., Agricult. Res. 1969. - Vol. 20, N.l. - P. 1-18.

331. Iwahori S., Weaver R., Pool R.M. Gibberellin-like activity in Berries of seeded and seedless Tokay grapes. // Plant Physiol. 1968. - Vol.43, N.3. - P.333-337.

332. Kang Y., Weaver R., Pool R.M. Effects of low temperature andbgrowth regulators on germination of seeds of Tokay grapes. //Proc. Amer. Soc. Hort. Sci. -1968,- Vol.92. -P.323-330.

333. Kasimatis A.N., Weaver R.J., Pool R.M., Halsey D.D. Respons of "Perlette" grape berries to gibberellic acid applied during bloom or at fruit set. // Amer.J. Enol. Viticult. 1971. - Vol.22. - P.19-23.

334. Lavel S. Effect of gibberellic acid on seeded grapes.// Nature. 1960,-Vol.185, N.4710. - P.395.

335. Lavin A.A., Valenzuela B.J. Effect of gibberellic acid on yield and berry characters of grape (Vitis Vinifera L.) Cultivar Moscatel Rosada. // Agricult. Tec.(Chili). 1975,- Vol.35. - P.85-89.

336. Lilov D., Christov Ch. Content of free gibberellins in the inflorescences and cluster of vines of different flower and fruit formation. // C.R.Acad. Bulg. Sci. -1977. Vol.30. -P.747-750.

337. Looney N.E. Some growth regulator effect on berry set, yield and quality of Himrod and de Chaunac grapes. // Can. J. Plant Sci. 1975.- Vol.55, N. 1. - P. 117120.

338. Looney N.E., Wood D.E. Some Claster thinning and gibberellic acid effects on fruit set, berry size, vine growthe and yild of de Chaunac grapes. // Can. J. Plant Sci. (Ottawa). !977.-Vol.57. -P.653-659.

339. Manivel L., Weaver R.J. Effect of growth regulators and heat on germination of Tokay grape seed. // Vitis.-1974.-Vol. 12.-P.286-290.

340. Mitchel E. Corelation of the force required to pick rotundifolia berries and their solube solids content. // Am. Enol. Vitis.-1979.-Vol. 19, N.l-P.135-138.

341. Nakagawa S., Nanjo Y. A morphological stady of Delaware grape Berries. // J.Jap. Soc. Hort. Sci. -Vol.34. -P.85-95.

342. Nakamura M., Takahashi E., Noda T. Rachis lignification and seedless Berry prodaction in seeded grape cultivar "Kuoho" as influenced by gibberellin and quercetin.// Techn. Bull. Fac.Hortic. Chiba. Univ. -1974. -N.22 -P.7-12.

343. Rappaport L. Gibberellic Acid: Some effect on Plant Growth, plant develepment and dormancy.// Western grower and shipper.-1957. Vol.28, N.ll.-P.80-84.

344. Randhava G.S., JierC.P. and Nath N. Causes and seedlessness in the Pusa seeless veriety of grapes (Vitis Vinifera L.). // Indian J. Hortic. -1962.-Vol.19, N.3 -P.155-139.

345. Reid D.M. and Crozier A. The effect of the export of gibberellins from the root to the shoot.//Planta.-1969.-Vol.43, N.4.-S.376-379.

346. Sacks R.M. and Weaver R.J. Gibberellin and aixin induced berry enlargement in Vitis Vinifera L. // J. Hortic. Sci. -1968,-Vol. 34, N.2.-P. 185-195.

347. Shindy W.W., WeaverR.J. Plant regulators after translocation of photosyntheticprodacts. //Nature. 1967. Vol.214.-P. 1024-1025.

348. ShindyW.W., Weaver R.J. Export of photosynthate affected when leaves are protreated with growth substances.// Nature.- 1970. -Vol.227.-P.301-302.

349. Skene K.G. Gibberellin like substances in root exudate of vitis vinifera.// Planta.-1967. -Vol.74 .-P.250-262.

350. Skirin R.M., Hull J.W. Gibberellic acid, seed namber and rate of maturation as related to univenripening "Concord" grapes.// Hort. Sci. -1972. -Vol.7. -P.391-392.

351. SugiuraA., InabaA. Staties on the mechanism of gibberellin induced seedlessness of Delaware grapes. I. Effect of pre-bloom gibberellin treatment on pollen germination. // J.Japan. Soc. Hort. Sci. -1966. -Vol.35. -P.233-241.

352. Takagi T., Furikawa Y., Tomana T. Stadies on the stabilisation of GA -induced seedless berry prodaction in Muscat Bailey A Grapes. II. Formation of Anormal by GA Application. // J. Japan. Soc. Hort. Sci. -1979.- Vol.48, N.2. -P.131-136.

353. WeaverR.J., McCuune S.P. Effect of gebberellin on seedless Vitis Vinifera. // Hilgardiu. -1959. Vol.2., N.6. -P.247-279.

354. Weaver R.J. Toxicity of gibberellin to seedless and seeded varieties of Vitis Vinifera.// Nature. 1980. -Vol.188, N.1443. -P.l 135-1136.

355. Weaver R.J., Alleveldt G., Pool R.M. Absorption and translocation of gibberellic acid in thi grapvine.// Vitis.- 1966. Bd.5, H.6.-S.446-454.

356. WeaverR.J., Pool R.M. Gibberellin-like activity in seeded fruit of vitis vinifera L. // Naturwissenschaften. 1965a. - Vol.52. - S. 111-112.

357. Weaver R.J., Pool R.M. Relation of seededness and ringing to gibberellin like activity in berries of vitis vinifera. // Plant Physiol. - 1965b. - vol.40. S.770-776.

358. Weaver R.J., Pool R.M. Berry response of "Thompson seedless" and "Perlete" grapes to application of gibberellic acid. // J.Amer. Soc. Hort. Sci. 1971a.- Vol.96.-S.162-166.

359. Weaver R.J., Pool R.M. Thinning "Tokay" and "Zinfandel" grapes by bloom sprays of gibberellin. // J.Amer.Soc.Hort.Sci. 1971b. - Vol.96.- S.820-822.

360. Weaver R.J., Shindy W., Klieewer W.M. Growth regulator induced movement of photosynthetic prodacts into fruits of "Black Corinth" grapes. // Plant Physiol. 1969. - Vol.44. - P.183-188.

361. WeaverR.J. Effect of time of application of potassium gibberellate on claster development of "Zinfandel" grapes. // Vitis.- 1975. Bd.14, H.2. - S.97-102.

362. Wood D.E., Looney N.E. Some claster thinning end gibberellic acid effects on juce and wine quality of de Chaonac grapes. // Can. J. Plant. Sci. (Ottawa).- 1977. -Vol.57. S.643-646.

363. Zuluaga P.A., Zuluaga E.M., Iglesia F.I. Indaction of stimulative Parthenocarpy im Vitis Vinifera L. // Vitis.- 1968,- Bd.7.,H.2. S.97-I04.

364. Zuluaga E.M., Zumelli J., Christensen F.I. Indaction of growth regulators on the characteristic of berries of Vitis Vinifera L. // Phiton. 1968. - Vol.25. - S.35-48.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.

19713 0

Любая ткань растений - это сообщество клеток, и если она изолирована (выделена) из целого организма, то лишена его регулирующего воздействия и питания. Следовательно, одним из принципов метода культуры тканей (клеток) является воспроизведение in vitro условий, близких или идентичных тем, в которых клетки находятся на материнском растении, для обеспечения их полноценного питания и развития.

Тогда при строгом соблюдении этих условий в культуре тканей размножаются (регенерируют) идентичные исходному генотипу клетки и растения. Это одно из направлений использования. Однако если такие условия достигаются и воспроизводятся не в полной мере, то клетка оказывается в относительно иных физико-химических условиях, что приводит к временному и качественному изменению в реализации ее генетической информации.

Смещая в эксперименте временную реализацию генетической информации (с помощью гормональных воздействий), можно наблюдать ее модификацию, а под влиянием различных экстремальных трансформирующих факторов возможно ее изменение в нужном направлении. Клетка в условиях культуры in vitro проявляет цитогенетическую неустойчивость, в результате этого возникают клетки с генетической гетерогенностью, появляются мутанты с измененным морфогенезом, которые могут быть исходным материалом для селекции.

Состав питательных сред и роль их отдельных компонентов

Питательные среды для культивирования изолированных клеток и тканей должны включать все необходимые растениям неорганические элементы: макроэлементы в миллимолярных концентрациях (азот, фосфор, калий, кальций, магний, сера), микроэлементы - в микромолярных (железо, бор, марганец, цинк, медь, молибден и др.), а также органические элементы: витамины, углеводы, аминокислоты и другие (например, гидролизат казеина, мезоинозит и др.).

В зависимости от консистенции существует деление на жидкие и твердые питательные среды.

Для приготовления твердых питательные сред используют агар-агар (0,7-1 %), который представляет собой полисахарид, получаемый из морских водорослей. Обычная его концентрация - 8-10 г на литр среды. Агар обеспечивает диффузию питательных элементов из среды в культивируемые ткани. Вместо агара можно использовать биогели.

Необходимо учитывать, что клетки растений и отдельные компоненты среды (витамины, фитогормоны, агар) чувствительны к определенным концентрациям водородных ионов. Например, агар в кислой среде теряет способность образовывать гель. В зависимости от объектов культивирования рН среды может варьировать от 5,2 до 6,6.

Неорганические элементы. Для роста растений в первую очередь необходимы углерод, кислород и водород. Если кислород и водород присутствуют в воздухе, то источником углерода для культуры изолированных тканей являются органические соединения. Но кроме этого для обеспечения полноценного метаболизма и его регуляции в изолированной культуре необходим ряд макро- и микроэлементов неорганического происхождения.

Макроэлементы присутствуют в среде в концентрациях порядка 10 М. Наиболее значимы из них азот, фосфор, натрий, калий, магний, кальций и сера.

Микроэлементы составляют в среде концентрации 10-6 М. Присутствие их обязательно при культивировании ткани в жидкой среде. По некоторым данным, отсутствие микроэлементов уменьшает интенсивность роста на 40 % в первом пассаже и приводит культуру к гибели в течение двух следующих пересадок. На агаризованой среде растения не так остро реагируют на отсутствие микроэлементов, так как в агаре содержатся многие микро- и некоторые макроэлементы.

Наиболее важными микроэлементами являются железо и медь, потому что они участвуют в регуляторных процессах и окислительно-восстановительных превращениях, входят в состав важных коферментов. Далее следуют марганец, цинк, молибден, кобальт и бор.

Органические составляющие сред. Согласно многочисленным данным, хорошим источником азота является мочевина, особенно для тканей подсолнечника, табака, топинамбура и др.

В качестве дополнительного источника азота в состав сред добавляют аминокислоты (а-аланин, глутаминовую кислоту, глицин, аргинин, аспарагиновую кислоту) или гидролизат казеина - источник аминокислот.

В культуре изолированных тканей растений действие аминокислот значительно варьирует для разных тканей и разных физиологических состояний вводимых в культуру эксплантов. Полностью заменить нитраты как источник азота способны аланин, аргинин, глутаминовая и аспарагиновая кислоты, гликокол, аспарагин, пролин.

Формы аминокислот также по-разному влияют на рост: D-формы -токсичны, L-формы - пригодны. Аминокислоты, внесенные в питательную среду в дополнение к нитратам, могут оказывать стимулирующее, угнетающее и формативное действие на рост культуры тканей. Это зависит как от самой аминокислоты, так и от ее содержания в среде.

Очень часто исследователи заменяют смесь аминокислот гидрлизатом казеина. Последний способен увеличивать содержание никотина в культурах табака и подавлять биосинтез липидов во многих каллусных и суспензионных культурах.

Углеводы являются необходимым компонентом питательных сред для культивирования изолированных клеток и тканей растений, так как в большинстве случаев последние неспособны к автотрофному питанию.

Культуры тканей, даже зеленеющие на свету, не автотрофны в отношении углеводного питания. При изолировании и помещении на питательную среду кусочков хлорофиллоносных тканей они, как правило, теряют хлорофилл.

При выращивании на свету одни ткани остаются лишенными хлорофилла (галловая опухоль партеноциссуса, ткани сердцевинной паренхимы табака и др.). Другие ткани зеленеют на свету, но не способны обеспечивать себя полностью углеводами за счет фотосинтеза, и их необходимо выращивать на питательной средах, содержащих сахар.

При помещении кусочка ткани, изолированного из растения, на питательную среду без сахара его содержание в ткани начинает уменьшаться.

Трата сахаров зависит от сезонных изменений в самой ткани (ткани, взятые весной, теряют сахаров больше) и от содержания ауксинов в среде. При образовании каллуса старая ткань быстро теряет сахара, а в новообразующейся их количество возрастает. При помещении ткани на питательную среду, снабженную сахаром, ткани поглощают и трансформируют сахара. Количество поглощенного сахара и в особенности его превращения в другие формы зависят как от источника сахаров в среде, так и от типа ткани.

Наилучшим источником углеродного питания для большинства тканей является сахароза, обычно применяемая концентрация ее в питательной среде составляет 2-5 %. Чаще всего в качестве углеводов используют сахарозу в концентрации 3 %. Помимо сахарозы в качестве источника углеродного питания можно использовать глюкозу, фруктозу, галактозу и др. После сахарозы наиболее употребляемым источником углеродного питания для культивирования тканей растений является глюкоза. Из 33 исследованных культур (травянистых и древесных) 85 % имели отличный и хороший рост на среде с глюкозой.

На третьем месте по эффективности использования культурами тканей растений стоит фруктоза. Ее успешно используют для своего роста 2/3 культур фруктозу. Галактоза заметно отличается от глюкозы и фруктозы по действию на рост изолированных тканей растений. Более половины изученных культур почти не используют галактозу для роста. Однако есть данные, отмечающие положительную роль галактозы для культивирования тканей и органов растений.

В отличие от изолированных корней, которые могут расти только на среде с сахарозой, другие ткани, обладающие активными гидролитическими ферментами, могут использовать для питания самые разнообразные сахара и полисахариды. Способность ткани усваивать те или иные сахара зависит от ее происхождения. Перенос ткани с более бедной сахаром среды на более богатую обычно не вызывает нежелательных явлений, обратный перенос приводит к некрозам тканей.

Основное действие сахарозы состоит в увеличении уровня образования метаболитов, использование исходно повышенных концентраций сахарозы обычно приводит к росту выхода вторичных метаболитов в культурах. Влияние изначально высоких концентраций сахарозы, вероятно, состоит в увеличении осмотического потенциала среды.
Необходимо отметить влияние условий стерилизации на действие сахаров. При автоклавировании сахароза дает следы глюкозы и фруктозы, а в среде с сахарозой, которая не подверглась специальной очистке, наблюдается образование веществ, стимулирующих рост тканей.

Выращивание хлорофиллоносных и лишенных хлорофилла тканей на свету или в темноте изменяет как содержание растворимых сахаров в ткани, так и соотношение разных их групп. Различия в спектральном составе света также сказываются на углеводном метаболизме тканей.

Витамины принадлежат к активным веществам, играющим существенную роль в культуре тканей. Известно, что в процессе роста растения синтезируют необходимое им количество витаминов. Несмотря на это, исследования показывают, что при внесении витаминов в питательную среду рост ткани улучшается. Большая часть витаминов входит в состав ферментов, катализирующих многие метаболически важные реакции. Витамины делятся на водорастворимые и жирорастворимые.

В состав сред чаще всего включают водорастворимые витамины: тиамин, рибофлавин, биотин, пантотеновую кислоту, пиридоксин, аскорбиновую кислоту. При внесении полной смеси витаминов стимулирующее действие может определяться синергизмом между отдельными витаминами. По наблюдениям Хендерсона, смесь витаминов наиболее активна после слабого роста ткани в предыдущем пассаже.

Действие витаминов на рост культуры тканей зависит от способности ткани синтезировать их в оптимальном или субоптимальном количестве и от состава других компонентов питательной смеси, с которыми витамины могут взаимодействовать синергически или антагонистически. Интересно, что клеточная суспензия, полученная путем помещения ткани в жидкую среду, при пассировании значительно более чувствительна к недостатку витаминов, чем сама ткань. Исключение из среды холина и аскорбиновой кислоты приводит к увеличению одиночных суспендированных клеток. Следует отметить, что в каждом конкретном случае место отдельного витамина в сложной цепи метаболизма различно.

Клетки растений и животных более чувствительны, чем микроорганизмы, к присутствию посторонних ингредиентов, поэтому требуют химически чистых компонентов среды.

Вместе с тем некоторые питательные среды содержат натуральные биологические добавки: жидкий эндосперм кокосового ореха (кокосовое молоко), каштана, картофельный отвар и др. Они являются поставщиками более сбалансированных питательных компонентов по сравнению с искусственными средами.

В целях предотвращения возможного бактериального и грибного загрязнения в среды добавляют иногда такие антибиотики, как полиены (амфотерицин В, нистатин), карбенициллин, цефалоспорин и его производные, левомицитин, аминогликозиды (гентамицин сульфат, канамицин моносульфат), рифамгащин и др. Большинство антибиотиков неустойчиво при нагревании, поэтому их растворы стерилизуют фильтрацией через мембраны.

Наличие макро- и микроэлементов в составе культуральных сред определяется потребностями объектов культивирования. Широко применяемые в настоящее время среды Гамборга В5 и Мурасиге и Скуга (МС) (табл. 4.1, табл. 4.2) содержат по сравнению со средами Уайта значительно большие количества калия, фосфора и микроэлементов.

Таблица 4.1. Примеры составов наиболее употребляемых питательных сред для культивирования растительных клеток тканей



В настоящее время существует большое количество различных прописей питательных сред для культивирования изолированных тканей и клеток. Их состав зависит от задач культивирования, видов растений и типов эксплантов. Наиболее часто используемая среда Мурасиге и Скуга, впервые была составлена и предложена в 1962 г. Кроме того, в настоящее время широко известны среды Уайта, Нича, В5, N6 и др. (табл. 4.1), отличающиеся набором отдельных составляющих компонентов и их соотношением. Существуют и коммерческие препараты питательных сред, выпускаемые иностранными и российскими фирмами.

Таблица 4.2. Состав среды Мурасиге-Скуга





МС - самая универсальная среда, пригодная для образования и роста каллуса, индукции морфогенеза у большинства двудольных растений. Среда Гамборга и Эвелега применима для бобовых растений и злаков. Среда Уайта обеспечивает укоренение побегов и нормальный рост стебля после регенерации. Среда Нича рекомендуется для индукции андрогенеза в культуре пыльников.

Н.А. Воинов, Т.Г. Волова